论文部分内容阅读
目的:通过实验研究观察参附汤对CKD大鼠肾功能、肾脏组织形态及TGF-β1/Smads信号通路的影响,以探讨参附汤延缓CKD进展及抗肾间质纤维化的作用机理。方法:本研究选用60只SPF级SD大鼠,适应性饲养7日后随机分为空白组12只、造模组48只。造模组采用腺嘌呤灌胃的方法建立CKD大鼠模型,造模完成后空白组、造模组各组随机处死3只大鼠,运用HE染色验证造模成功。验证后将造模组随机分为模型组、尿毒清颗粒组、参附汤低剂量组、参附汤中剂量组、参附汤高剂量组,每组9只。各组大鼠干预治疗28天,治疗期间注意观察大鼠一般状态及体重变化。28天后收集大鼠血液、肾脏标本进行检测。采用HE、Masson染色方法观察肾脏组织形态变化情况;采用ELISA法检测CKD大鼠血清中TGF-β1、CTGF及TNF-α的表达情况;采用Western Blot法检测大鼠肾组织内TGF-β1、p-Smad2/3、Smad7蛋白的表达水平;采用免疫组织化学染色法检测TGF-β1、Smad2、CTGF、IL-8、TNF-α、Smad7在CKD大鼠肾脏中的表达水平;采用RT-PCR法检测CKD大鼠肾组织中TGF-β1m RNA、Smad2m RNA、Smad7m RNA的相对表达量。结果:1.参附汤各剂量组大鼠一般状态均有不同程度改善,在体重、尿量、饮食量及精神状态等方面均显著优于模型组。参附汤高剂量组与尿毒清颗粒组一般状态较参附汤中、低剂量组略优。2.生化与血常规结果显示:与空白组相比,模型组大鼠血清血肌酐、尿素氮含量显著升高(P<0.01);与模型组比较,参附汤各治疗组血清血肌酐、尿素氮含量均有不同程度下降(P<0.05)。各治疗组中参附汤高剂量组血肌酐、尿素氮下降水平与尿毒清颗粒组相似,优于参附汤中、低剂量组。与空白组相比,模型组大鼠血红蛋白含量显著下降(P<0.01);与模型组比较,参附汤各治疗组血红蛋白均有不同程度回升。各治疗组中参附汤高剂量组血红蛋白回升水平与尿毒清颗粒组相似,优于参附汤中、低剂量组。3.病理结果显示:参附汤各剂量组CKD大鼠肾组织纤维化程度均有不同程度改善,与模型组对比,参附汤各剂量组维化面积百分比均有不同程度下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。4.ELISA检测结果显示:与空白组对比,模型组大鼠血清中TGF-β1、CTGF、TNF-α的表达均显著升高(P<0.01);与模型组对比,参附汤各剂量组能在一定程度上降低大鼠血清中TGF-β1、CTGF及TNF-α的表达(P<0.05)。5.Western Blot检测结果显示:与空白组对比,模型组大鼠肾组织中TGF-β1、p-Smad2/3的表达均显著升高(P<0.01);与模型组对比,参附汤各剂量组大鼠肾组织中TGF-β1、p-Smad2/3的表达水平均有不同程度下降(P<0.05)。与空白组对比,模型组大鼠肾组织中Smad7的表达显著下降(P<0.01);与模型组对比,参附汤各剂量组能在一定程度上升高大鼠肾组织中Smad7的表达(P<0.05)。6.免疫组化法检测结果显示:与空白组对比,模型组大鼠肾组织中TGF-β1、Smad2、CTGF、IL8、TNF-α的表达均显著升高(P<0.01);与模型组对比,参附汤各治疗组各炎症指标的表达均不同程度下降(P<0.05)。与空白组对比,模型组大鼠肾组织中Smad7的表达显著下降(P<0.01);与模型组对比,参附汤各治疗组Smad7的表达均不同程度上升(P<0.05)。7.RT-PCR检测结果显示:与空白组对比,模型组大鼠肾组织中TGF-β1m RNA、Smad2m RNA的相对表达量均显著上调(P<0.01);与模型组对比,参附汤各治疗组TGF-β1m RNA、Smad2m RNA的相对表达量均不同程度下调(P<0.05)。与空白组对比,模型组大鼠肾组织中Smad7m RNA的相对表达量显著下调(P<0.01);与模型组对比,参附汤各治疗组Smad7m RNA的表达均不同程度上调(P<0.05)。结论:1.参附汤能够改善CKD大鼠一般状态,升高血红蛋白,改善肾功能及肾脏病理损害。2.TGF-β1/Smads信号转导通路可能是参附汤抗肾间质纤维化的作用机制之一。基于此转导通路参附汤能够有效减少CKD大鼠血清及肾脏中TGF-β1、CTGF、TNF-α等促纤维化因子的表达,增加抗纤维化因子Smad7的表达,进而减少细胞外基质合成与细胞凋亡。3.参附汤在延缓CKD进程上具有一定的抗肾间质纤维化作用,其中参附汤高剂量组效果较好,提示在本研究中药量与药效呈正相关。