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目的本论文旨在建立一种与临床特征更为接近的何首乌致大鼠肝损伤动物模型,并在此模型基础上探讨何首乌醇提液致大鼠肝脏药物代谢酶细胞色素P450(CYP450)的表达调节作用;接着对固有免疫炎症信号通路Toll样受体4(TLR4)介导的My D88依赖性信号通路和非依赖性(TRIF)信号通路下游相关因子的表达与何首乌肝毒性作用机制的相关性进行探究。方法雄性SD大鼠130只,随机分为8组:空白对照组(control,20只),脂多糖组(LPS,20只),对乙酰氨基酚组(APAP,15只),LPS+对乙酰氨基酚组(LPS+APAP,15只),何首乌低剂量组(PMT-L,15只)、LPS+何首乌低剂量组(LPS+PMT-L,15只)、何首乌高剂量组(PMT-H,15只)和LPS+何首乌高剂量组(LPS+PMT-H,15只)。尾静脉注射4mg/kg体重的诱导剂LPS,2h后,APAP组和LPS+APAP组大鼠分别按组别灌胃给予625mg/kg对乙酰氨基酚,PMT-L和LPS+PMT-L组给予6g/kg何首乌,PMT-H和LPS+PMT-H组给予12g/kg何首乌,每日一次,连续给药7d。每天观察大鼠体重变化,在造模过程中,第2h、14h、5d和8d对各个剂量组大鼠腹主动脉采血,检测肝功能生化指标;解剖,记录肝重;HE染色组织病理学检查;荧光法测定肝细胞中细胞色素CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1酶活性的变化;提取肝脏总RNA,采用Realtime-PCR法检测这三种亚酶及My D88、NF-KB P65、TRIF、IRF-3 m RNA表达情况,并应用Western blot法检测CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1、TLR-4、My D88、NF-KB P65、TRIF、IRF-3蛋白的表达情况。结果大鼠经LPS诱导后,与空白对照组相比,体重下降,肝脏系数升高;第2h和14h,LPS组、LPS+APAP组和LPS+PMT-L/-H组ALT、AST和ALP含量显著升高;组织病理学检查发现,大鼠尾静脉注射LPS诱导2h后,肝实质微小肉芽肿,随着给药时间的延长,LPS组大鼠肝损伤逐渐恢复,于第8天发现,LPS组大鼠肝组织结构清晰,肝细胞质稍红染变性,LPS+APAP组和LPS+PMT高低剂量组肝细胞灶状坏死,伴炎细胞浸润。何首乌醇提液组能明显降低大鼠肝脏CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1酶的活性;RT-PCR法测定发现何首乌醇提液能显著降低大鼠肝脏CYP1A2m RNA表达,显著升高大鼠肝脏CYP3A1、TLR-4、My D88、NF-k B P65、TRIF、IRF-3m RNA的表达,而对CYP2E1 m RNA表达没有显著影响;Western-blotting法检测发现,何首乌醇提液能显著降低大鼠肝脏CYP1A2蛋白的表达,而对CYP2E1和CYP3A1蛋白表达没有显著变化,能显著升高大鼠肝脏TLR-4、My D88、NF-k B P65、TRIF、IRF-3蛋白的表达。结论以LPS为诱导剂可以很好地模拟临床何首乌特异质肝损伤,显著增强何首乌对实验动物的肝损伤,其毒性的发生及LPS诱发的免疫作用与抑制CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1的活性,抑制CYP1A2蛋白及m RNA表达和增强CYP3A1m RNA表达有关。TLR4/My D88/NF-k B信号通路的激活和TLR4/IRF-3信号通路的激活也是LPS诱导何首乌醇提液肝损伤的作用机制之一。