在不久的未来,手性药物将会成为药物市场中一种占比份额较大的组成,但手性的存在也曾给人类带来不小的伤害和反思。对于手性化合物的拆分研究将会对手性药物的发展带来意义深远的价值。对西鲁瑞韦和布瓦西坦药物关键中间体的拆分研究将有助于推进治疗丙型肝炎和癫痫的药物发展。论文的研究工作主要围绕以下几个方面:通过鸟枪法对Sphingomonas aquatilis JSS7菌株构建了包含2-8 kbp片段长度的基因文库,连接效率为66.7%。根据目标底物的特点,建立了一种基于pH变化而显色的高通量筛选方法,以乙酸苯乙酯为底物,溴百里香酚蓝为显色剂,筛选了近8500株重组子,获得了 6个片段,其中包含该菌属的细胞色素P450。以丙二酸二甲酯出发优化(rac)-2-丙基琥珀酸甲酯-4-叔丁基酯的合成步骤,经过三个步骤,收率达到93.6%。通过实验室已有资源对布瓦西坦关键中间体琥珀酸酯衍生物进行生物催化,以(rac)-2-丁基琥珀酸甲酯-4-甲酯为底物,筛选了实验室现有的酶类资源,Sphingomonas aquatilis JSS7拆分R构型,枯草芽孢杆菌CQ和大肠杆菌拆分S构型,ee值均达到75%以上。针对大肠杆菌的反应体系做出优化,底物浓度2 g/L,温度37℃,反应时间15 h,磷酸钾溶液(pH 7.5)为缓冲体系,菌体量300 mg,ee值为96.7%,转化率为56.2%,为该类琥珀酸酯衍生物的手性拆分工作提供了新的思路。