小分子环境污染物PAHs和PAEs的免疫学检测方法研究

来源 :上海交通大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:chuhai
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随着工业化的发展,水环境中的小分子污染物被越来越多的检出,其中最为典型的两类小分子污染物为多环芳烃类(PAHs)和邻苯二甲酸酯类(PAEs)化合物。本研究以PAHs中的萘(NAP)和PAEs中的邻苯二甲酸二乙酯(DEP)为研究对象,旨在利用免疫学检测方法,制备可以特异性快速检测NAP和DEP的试纸条,以满足对现场水样中该类环境污染物的快速检测需求。首先依据半抗原的设计原理,设计2-萘丁酸和邻苯二甲酸单乙酯分别作为NAP和DEP的半抗原,并优化碳二亚胺法和混合酸酐法配比方案,制备2-萘丁酸-钥孔血蓝蛋白(KLH)和邻苯二甲酸单乙酯-牛血清蛋白(BSA)人工免疫抗原,其偶联比均介于10-20之间。在人工免疫抗原的基础上,制备NAP和DEP单克隆抗体,所获得的NAP和DEP单克隆抗体效价分别可以达到1:15625和1:30000以上。筛选出单克隆抗体标记胶体金颗粒的最优条件为p H=7.2,抗体标记量为6μL/m L,从而获得稳定的DEP金标抗体溶液。通过胶体金酶联免疫层析法,将包被抗原、金标抗体和羊抗鼠Ig G结合到空白试纸条上,获得DEP酶联免疫层析试纸条,该试纸条对DEP的检测灵敏度可以达到20μg/L,对11种结构类似物的交叉反应率小于2%,试纸条在室温干燥条件下至少可以保存90天。利用本试纸条和GB5009.271-2016国标法对所模拟的DEP污染的海水样品进行检测,结果显示当试纸条显色结果为-时,对应GC-MS测定浓度低于7.32μg/L;当显色结果为+时,对应浓度范围为38.93-156.72μg/L;当显色结果为++时,对应浓度范围为156.72-628.69μg/L;当显色结果为+++时,对应浓度高于628.69μg/L。对于实际水体检测,选取苏州太湖流域和东海区域共计36个采样点位的水样DEP进行检测,结果为均低于7.32μg/L。表明,实际水样中受到DEP的污染程度较小。
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