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白癜风是一种常见的色素脱失性皮肤病,全世界发病率约为1%-2%[1]。该病发病机制复杂,可能的机制有:自身免疫、黑素细胞自毁、神经介质、遗传因素等等。近几年研究发现:在白癜风患者表皮内氧化应激增加,出现高浓度的过氧化氢(H2O2)聚集,并导致黑素细胞形态及功能改变[2-5]。Dell等[6]使用抗氧化剂与NB-UVB联合治疗白癜风,疗效明显。这表明白癜风患者中存在氧化应激失衡,且与H2O2关系密切。目的:通过建立体外H2O2对黑素细胞的氧化损伤模型,检测槲皮素、银杏叶提取物、白藜芦醇、维生素C保护鼠永生化黑素细胞(B10Br)对抗H2O2诱导的氧化应激的有效性,并且检测其对黑素细胞生物学活性影响,为白癜风临床治疗提供有应用价值的抗氧化中药。方法:采用MTT法测定细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,倒置显微镜下观察细胞形态改变,并检测具有抗氧化活性的中药单体对黑素细胞酪氨酸酶活性及黑素合成的影响。结果:1.体外H2O2诱导黑素细胞的氧化应激模型的建立经不同浓度H2O2处理24小时后,黑素细胞活性显著下降,并呈剂量依赖性关系。当H2O2浓度为200μM时,细胞活性大约下降至(53.88±3.00)%(P<0.01)。200μM H2O2处理不同时间后细胞活性显著下降,呈现时间依赖性关系。当H2O2处理24小时后,细胞活性下降至(54.53±2.23)%(P<0.01)。流式细胞仪检测:经H2O2处理后,早期及晚期凋亡细胞百分比明显升高。倒置显微镜下观察可见:黑素细胞树突缩短或消失,贴壁细胞数量减少,悬浮坏死的细胞逐渐增多,并出现细胞碎片,呈现出剂量/时间依赖性效应。2.中药单体对黑素细胞活性影响采用不同浓度的抗氧化剂处理黑素细胞24小时后检测细胞活性。选取0.1,0.33,1,3.33,10,33.33,100μM槲皮素;0.33,1,3.33μM白藜芦醇;0.05,0.17,0.5,1.67,5,16.67,50μM银杏叶提取物;0.1,0.33,1μM维生素C对黑素细胞活性影响较小(P>0.05)的药物浓度进行后续抗氧化试验。3.中药单体对黑素细胞抗氧化保护效应经33.33μM槲皮素、0.33μM白藜芦醇及16.67μM银杏叶提取物预处理24小时后,细胞活性显著增高,分别为(94.22±3.36)%(P<0.01);(77.42±7.48)%;(P<0.05)及(76.57±2.99)%(P<0.01)。而经维生素C预处理后,细胞活性无显著增高,仅为59.93%±2.16%(P>0.05)。流式细胞仪检测:抗氧化剂预处理后早期及晚期凋亡细胞百分比下降。倒置显微镜下观察可见:经槲皮素、白藜芦醇及银杏叶提取物预处理24小时后,黑素细胞树突无明显回缩,存活的细胞数目较多,而经维生素C预处理后,黑素细胞树突明显缩短,存活的数目较少。4.中药单体对黑素细胞生物学活性影响经200μM H2O2处理后,黑素细胞的酪氨酸酶活性及黑素含量下降,而经33.33μM槲皮素、0.33μM白藜芦醇及16.67μM银杏叶提取物预处理24小时后,黑素细胞的酪氨酸酶活性及黑素含量可显著提高。其中以槲皮素增高最为明显。结论:H2O2通过促进黑素细胞凋亡影响其活性影响,并呈浓度及时间依赖性关系。槲皮素、白藜芦醇及银杏叶提取物可抑制黑素细胞凋亡提高细胞抗氧化活性。槲皮素、白藜芦醇及银杏叶提取物等抗氧化剂可增高酪氨酸酶活性及黑素含量。