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本文以人早幼粒白血病HL-60细胞为材料,分别利用MTT法和台盼蓝排染法检测了epinodosin对HL-60细胞的生长抑制作用;用流式细胞术检测了epinodosin引起HL-60细胞周期阻滞的作用;进一步通过吉姆萨染色、Hochest33324染色、NBT还原能力、荧光颗粒吞噬能力以及细胞表面抗原CD11b的表达情况的检测,探索了epinodosin诱导HL-60细胞向成熟粒细胞分化的能力,并通过检测细胞内ROS和CD11b不同处理下的表达水平对epinodosin诱导分化的机制进行了初步探讨;另外,我们HL-60细胞趋于成熟细胞分化过程中细胞骨架的变化做了相关的检测。其结果如下:1.采用MTT法和台盼蓝染色法发现:2.0μM、4.0μM、6.0μM和8.0μM epinodosin以时间和浓度的依赖性的方式对HL-60细胞的生长有明显的抑制作用,其中6.0μM epinodosin处理组和1.2μM ATRA处理组具有相似的结果。2.采用以PI染色流式细胞术检测了epinodosin对HL-60细胞周期的影响,结果表明该化合物能以浓度依赖性的方式引起HL-60细胞S期阻滞,抑制细胞生长。3.采用吉姆萨染色法、Hochest33324染色、NBT还原能力检测、细胞吞噬能力检测法以及流式细胞术检测发现:随着药物浓度的增加,细胞内肾形核、分叶核增多,NBT还原能力增强,细胞吞噬能力增强,CD11b阳性细胞率增大,说明epinodosin能够诱导HL-60细胞向成熟粒细胞分化。4.采用DCFH-DA染色及流式细胞术检测并结合荧光显微镜观察HL-60细胞内ROS水平,发现4.0μM和8.0μM epinodosin作用6 h后细胞内ROS显著升高,作用12 h和24 h较6 h细胞内ROS整体水平明显下降,但又比对照稍有升高,说明短时间内epinodosin可以引起细胞内ROS的上升。在6 h处理组中同时加入0.3 m M NAC和8.0μM epinodosin后,细胞内细胞内ROS水平比8.0μM epinodosin单独处理后明显减少,说明NAC可以降低epinodosin引起的细胞内ROS的产生。5.通过流式细胞术检测0.2 m M APO联合8.0μM epinodosin作用72 h后细胞表面抗原CD11b的表达,发现0.2 m M APO联合8.0μM epinodosin处理组中细胞表面抗原CD11b阳性细胞率要比8.0μM epinodosin单独处理组下降了33.59%,说明APO可以抑制epinodosin诱导的分化作用,侧面说明细胞分化过程中ROS的产生和NADPH氧化酶密切相关。6.通过流式细胞术检测0.1μΜDPI联合8.0μM epinodosin作用72 h后细胞表面抗原CD11b的表达,发现0.1μΜDPI联合8.0μM epinodosin处理组中细胞表面抗原CD11b阳性细胞率要比8.0μM epinodosin单独处理组下降了26.44%,说明DPI可以抑制epinodosin诱导的分化作用,侧面说明细胞分化过程中ROS的产生和NADPH氧化酶密切相关。7.通过罗丹明标记的鬼笔环肽染色法对细胞内微丝染色发现:药物作用24 h后,6.0μM epinodosin处理组细胞内出现明显的荧光亮斑,而且微丝变得稠密,说明药物处理后细胞内微丝增多;与24 h相比,6.0μM epinodosin作用72 h后细胞整体荧光减弱,细胞外周环状明显,细胞内一侧有荧光聚集的亮斑。以上说明在药物引起的细胞分化过程中微丝骨架在不断的改变。8.通过间接免疫荧光法对细胞内微管染色发现:药物作用24 h后对照组中微管稀薄,主要集中分布在细胞外周,呈现出一个荧光较亮的环状,而6.0μM epinodosin处理组中,微管稠密、均匀的分布在细胞内,较对照明显增多。作用72 h后,对照组细胞内微管分布相对均匀、稠密;6.0μM epinodosin处理组细胞内微管呈较粗束状,纵横交错分布于整个细胞内。以上结果说明在药物诱导细胞分化过程中,细胞微管骨架在不停地组装中。9.通过间接免疫荧光法对细胞内波形蛋白染色发现:处理24 h后,6.0μM epinodosin处理组中细胞整体荧光增强,细胞内束状纤维明显较对照增多,并在细胞内一侧聚集成明显的荧光亮斑;处理72 h后,对照组内束状纤维较24 h时间段明显增多并较均匀的分布在细胞内,而6.0μM epinodosin组中更多的细胞内出现聚集的荧光亮斑,且束状纤维变粗。说明在药物诱导细胞分化的过程中,波形蛋白在不断的组装。