第一部分自身免疫性肝炎肝移植的临床研究研究背景及目的：自身免疫性肝炎(AIH)是肝移植中相对少见的适应证,女性多见,不管肝移植术后免疫抑制剂的应用,AIH可能会复发,部分移植物可能会进展至肝功能衰竭。因此,了解AIH复发的危险因素,探讨新的治理策略对预防AIH复发,改善预后有重要的意义。这个研究的目的是去分析自身免疫性肝炎肝移植的远期效果,探讨怀孕和脾切除对AIH复发中的影响。研究方法：回顾性分析2004年3月～2013年12月间在山东大学附属山东省立医院随访的12例患者的临床资料。所有患者均为女性,均因慢性AIH所致的终末期肝病行肝移植。所有患者术前均有激素治疗史。对于术前免疫抑制剂治疗时间大于1年的患者,在肝移植的同时行脾切除术,而对于术前免疫抑制剂治疗时间小于1年的患者,仅行肝移植术。结果：12例患者平均随访49.4个月(6-117个月).在12例患者中,10例患者(例1-例10)术前激素治疗时间≥1年,同时行脾切除术,2例患者(例11-例12)术前激素治疗时间小于1年,仅行肝移植术。例1在肝移植后19天出现肠系膜上静脉血栓,经抗凝、溶栓治疗痊愈。例7在肝移植术后7个月,出现肺部感染,并最终死于呼吸功能衰竭。3个患者自身抗体滴度逐渐缓慢降至正常,然而,其他患者的自身抗体滴度始终维持在较低水平,不能降至正常,且自身抗体类型同术前一致。例11在肝移植术后26个月AIH复发,99个月后死于AIH所致的肝衰,而在同时行脾切除的患者中未发现有AIH复发者。例1在肝移植后9年怀孕,自身抗体在怀孕期回是平稳的，产后轻度升高,将强的松加量后降至正常水平。结论：自身免疫性肝炎肝移植通常有很好的远期效果,由于原发病所致的免疫功能紊乱并不能被肝移植所纠正,因此,自身免疫性肝炎在肝移植后依旧需要长期的激素治疗。为减少AIH复发,改善预后,AIH肝移植术后与AIH复发相关的危险因素应加以重视。怀孕可能是影响AIH复发的一个危险因素,怀孕期间需监测自身抗体变化。在AIH复发的高危患者中,同时行脾切除术可能是一个值得考虑的选择。第二部分Tim-3调节单核细胞影响HBV相关肝炎及肝癌研究背景及目的：肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是世界上最常见的恶性肿瘤之,在世界范围内发病率和致死率分别排在第五和第三位。HCC致病机制复杂,肝癌的发生、发展、转移是多阶段、多因素参与的动态过程。流行病学研究发现,90%以上的HCC患者存在有HBV或HCV感染引起的炎症,慢性肝炎和不断的肝损伤引起肝硬化,最终可发展为肝癌。近年来随着影像、血液学检测、B超等技术手段的不断发展和提高,肝癌的早期诊断率得到了大大提高,治疗手段亦由单纯的手术发展到肝癌射频消融治疗、经肝动脉化疗栓塞、中医中药、免疫治疗、分子靶向治疗及肝移植等综合治疗,但其预后仍欠佳。因此,深入研究HCC的发病机制、寻找能够有效治疗HCC的细胞和分子靶点意义重大。现在,随肿瘤分子生物学的发展,人们对肿瘤相关炎症有了更深入的理解,许多的研究从不同的方面证实了炎症在肿瘤的发生及发展中扮演了重要的角色。众所周知,作为重要的固有免疫细胞,巨噬细胞是机体抗感染的第一道防线,参与多种炎症相关疾病。巨噬细胞具有很强的可塑性,可以活化为两种不同的类型：Ml型,即经典活化的巨噬细胞(Classically activated macrophage)和M2型,即替代性活化的巨噬细胞(Alternatively activated macrophage),其活化由单核细胞的异质性和周围微环境所决定。M1具有抗感染和抗肿瘤的作用,M2具有损伤修复和组织重构,促进血管生成和肿瘤生长的作用。在肿瘤组织中M1和M2是混杂存在的,M2型巨噬细胞极化为优势细胞时产生促肿瘤效应。Tim-3(T cell immunoglobulin domain and mucin domain-containing molecule-3)是2001年新发现的免疫调节分子,在适应性免疫反应中作为负调控因子,而在不同固有免疫细胞中介导不同的免疫调节作用。Tim-3的表达与持续的HBV感染相关,在慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)致肝癌的进程中,Tim-3在固有免疫细胞上的表达如何,是否与HCC的发生发展相关目前仍知之甚少。本研究检测了Tim-3在健康人群、慢性乙型肝炎患者、HCC患者外周血中单核细胞上的表达情况,分析Tim-3表达和HBV/HCC相关临床资料之间的相关性,进一步探讨Tim-3对单核巨噬细胞的作用及其对肝癌生长的影响,为抗肿瘤免疫治疗及预后判断提供新思路。研究方法：利用流式细胞术检测在健康志愿者、CHB患者和HCC患者外周血单核细胞上的Tim-3表达,利用RT-PCR分析HCC患者术前术后外周血单个核细胞上Tim-3mRNA水平变化,利用流式细胞术检测CD163和Tim-3在肝癌患者外周血单核细胞上的共表达情况。统计学分析Tim-3表达在健康志愿者、CHB患者和HCC患者外周血单核细胞上的Tim-3表达趋势,HCC患者术前术后Tim-3mRNA水平变化,分析HCC患者中单核细胞Tim-3+组和Tim-3-组之间CD163的表达有无差异及Tim-3表达与HBV定量、HBeAg、HBsAg、ALT、AST或肝癌不同组织病理分期之间的相关性。结果：4.1Tim-3在健康志愿者、慢乙肝和原发性肝细胞癌患者外周血单核细胞上的表达水平呈显著上升趋势。4.2HCC患者手术切除肿瘤后外周血PBMCs中Tim-3mRNA水平显著下降,外周血单核细胞上Tim-3表达显著下降。4.3CHB患者或HCC患者外周血单核细胞上Tim-3表达与是否HBeAg阳性不相关。CHB患者Tim-3表达与病毒滴度不相关。提示Tim-3表达与乙肝病毒复制无关。HCC患者中HBsAg(+)患者Tim-3表达水平显著高于HBsAg(-)患者,表明肝癌患者中Tim-3的升高与HBV感染有关。4.4CHB患者中Tim-3的表达与ALT或AST水平呈正相关,提示Tim-3的升高与HBV相关的免疫反应所致的肝脏炎症损伤相关。HCC患者中Tim-3表达与ALT或AST水平无相关性,HCC的ALT/AST与CHB比较,ALT、AST在低水平,提示与CHB患者相比较,HCC患者肝脏处于受抑制的炎症状态或形成免疫耐受。4.5HCC患者中外周血单核细胞Tim-3表达与肝癌组织病理分期呈正相关,提示Tim-3参与肝癌的进展、分化。4.6CD163是M2型巨噬细胞的表面标记,HCC患者中单核细胞Tim-3+组较Tim-3-组高表达CD163,提示Tim-3可能参与单核巨噬细胞M1向M2的转化。结论：外周血单核细胞上Tim-3的表达在慢乙肝以至HBV相关的原发性肝细胞癌的进程中逐渐增加,引起单核巨噬细胞向M2型极化,此环境有利于肝癌细胞的产生和发展。