滑液支原体(Mycoplasmasynoviae,MS)能够感染鸡和火鸡,引起关节滑液囊膜炎、腱鞘滑膜炎等,也可引起呼吸道疾病及气囊炎,严重的引发全身性感染,甚至造成死亡。核酸酶(Nuclease,Nuc)蛋白存在于多种病原菌中,是一种已知的重要的毒力蛋白,有研究表明其在诱导宿主细胞凋亡等方面发挥重要的作用。本文对滑液支原体的核酸酶样蛋白展开生物学功能研究,探究其在诱导宿主细胞凋亡中的作用,对于进一步研究滑液支原体致病机制具有重要意义。本文针对MS的全基因组序列,参照NCBI数据库中公布的鸡滑液支原体WVU1853株的nuc2基因序列,设计引物扩增nuc2全序列,并进行原核表达。通过核酸底物酶切试验及酶谱活性试验等对此蛋白的核酸酶活性进行验证。结果证明原核表达的Nuc2蛋白在37℃具有较好的酶切活性,可以降解质粒DNA、单链DNA以及RNA等,具有Ca2+依赖性,对Mg2+和Cu2+不敏感。另外还发现此蛋白具有一段耐热核酸酶功能区(SNC),缺失此功能区的Nuc2蛋白降解核酸底物的活性显著降低,以上结果表明Nuc2蛋白的SNC区为其核酸酶功能区。本文还利用MS攻毒后的鸡阳性血清对Nuc2蛋白进行免疫印迹分析,发现其具有免疫原性,同时利用Nuc2兔多抗对MS的膜蛋白进行Western-blot分析,结果发现Nuc2蛋白在MS的胞膜和胞浆中都有分布。为进一步探明Nuc2作为膜蛋白对宿主细胞DF1的粘附作用,利用间接疫荧光技术,将Nuc2蛋白直接作用于DF-1细胞,Nuc2兔多抗孵育后染色观察结果显示Nuc2蛋白能粘附DF-1细胞。以上研究证实MS的Nuc2蛋白是一个具有免疫原性的膜蛋白,并可能参与介导MS对宿主细胞的粘附。另外本文还采用DAPI染色、Annexin V/PI染色及流式细胞术检测Nuc2蛋白诱导DF-1细胞凋亡情况,进一步研究了 Nuc2蛋白在诱导细胞凋亡方面的作用;结果发现Nuc2蛋白可以诱导DF-1细胞凋亡,且随着作用时间的增长(8h、16h、24h),其诱导DF1细胞凋亡的量显著增加。本文证明了 MS的Nuc2蛋白是一个重要的具有核酸酶活性的膜相关蛋白,此蛋白可能参与MS对宿主细胞的粘附过程,同时证实MS的Nuc2蛋白能诱导宿主细胞凋亡。本研究为进一步开展滑液支原体致病机制研究及疾病预防工作研究奠定了理论基础。