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多糖属于作为T细胞非依赖性抗原,主要通过增强机体的非特异性免疫功能以抵御细菌、病毒和寄生虫等病原微生物的侵袭,其没有免疫记忆效应,无法直接诱导机体产生高效价特异性IgG抗体,因而在疫苗的制备上通常需将多糖连接于一定得载体上形成偶联物,刺激机体产生高亲和力IgG抗体。而两性葡聚糖与一般多糖不同,它能与抗原递呈细胞进而激活T细胞的免疫调节机制,之后诱导机体产生IgG亚类抗体。本课题着重讨论了两性葡聚糖体液免疫应答和调节效应的特异性及其产生机制。分别以中性糖、两性葡聚糖、糖蛋白为抗原,比较它们在抗体水平和细胞水平上的体液免疫应答和免疫调节效应,从而探寻两性葡聚糖在免疫行为上的特性。本课题采用硫酸酯化法修饰葡糖胺制备带有阴性基团和阳性基团的两性葡聚糖,采用双环氧试剂(1,4-二丁醇二缩水甘油醚)交联蛋白载体制备糖蛋白。相关检测结果显示,两性葡聚糖硫酸根浓度为36. 14 ug/ml,取代度为0.90,而氨基氮含量为35.04ug/ml,取代度为0.91,制得带有正、负电荷的基团的两性葡聚糖。糖蛋白交联产物电泳及HPLC检测结果表明,经双环氧试剂交联以及分离纯化等步骤获得了纯度较高的糖蛋白分子。采用中性葡聚糖(分子量分别为2万,27万)、两性葡聚糖、糖蛋白三种抗原体外刺激的细胞增殖以及细胞因子表达的结果表明,两性葡聚糖能显著促进不同糖免疫后的细胞增殖,并刺激细胞表达TLR4、TLR9、TNFα等细胞因子。中性糖、糖蛋白、两性葡聚糖刺激机体形成抗体生成细胞的实验结果显示,两性葡聚糖除了能刺激细胞表达IgM亚类抗体外还能刺激其表达IgG亚类抗体,而中性多糖则只能表达IgM亚类抗体。在抗体水平上通过ELISA检测中性糖、两性葡聚糖、糖蛋白抗体效价以及相对亲和常数,结果显示两性葡聚糖与糖蛋白有相似的免疫应答效应,都能刺激机体表达糖特异性的IgG类抗体,且两性葡聚糖抗原与其他糖刺激的抗体表现出较强的交叉反应。实验结果说明两性葡聚糖具有特异的免疫应答和调节效应,为多糖疫苗的设计与开发提供一个新的方向。