论文部分内容阅读
霍山石斛(Dendrobium huoshanense)是我国一种传统的药用植物,其茎部位可经加工成为枫斗,是一种珍贵的补品。本文以栽培的霍山石斛茎部位为原料提取多糖,以小鼠Raw264.7巨噬细胞为模型评价多糖的抗炎活性,并对高活性组分的结构进行解析,对其抗炎信号转导机制进行探讨,以期为阐明霍山石斛多糖功能与结构之间的联系奠定基础。(1)以巨噬细胞释放炎性介质NO水平为指标,对霍山石斛不同成分进行活性导向分离,经脱脂、水提醇沉、DE-52阴离子交换树脂分离、乙醇分级,获得抗炎活性不同的5种组分,其中以多糖组分c DHP-W1抗炎活性最佳。(2)理化性质分析表明,c DHP-W1是一相对分子质量为24 k Da、主要由Man和Glc按1.00:8.21摩尔比所组成的均一多糖,其碳水化合物含量为97.79%,特性粘度(?)为0.7192,并含有4.3%乙酰基和1.4%的糖醛酸。高碘酸氧化、FT-IR、GC-MS及1D和2D NMR分析揭示,c DHP-W1的主链由1,4-linked-Glcp、1,4-linked-Manp和1,4,6-linked-Glcp所组成,其支链为T-linked-Glcp。(3)利用LPS诱导的巨噬细胞炎症模型,初步探讨了c DHP-W1的抗炎活性及其作用机制。浓度梯度实验表明,c DHP-W1能够剂量依赖地抑制LPS诱导的NO、PGE2、TNF-α和IL-1β等炎性介质的分泌,当浓度达到200μg/m L时,抑制效果最为显著。LPS及c DHP-W1处理时间实验表明,当c DHP-W1预处理时间为1 h、LPS处理时间为24 h时,c DHP-W1对NO、PGE2、TNF-α和IL-1β分泌的抑制效果最佳。RT-PCR分析表明,不同的LPS及c DHP-W1处理时间下,i NOS、COX-2、TNF-α和IL-1β的表达量各不相同,当c DHP-W1预处理时间为1 h、LPS处理时间为12 h时,c DHP-W1可显著下调i NOS、COX-2、TNF-α和IL-1β的表达。Western Blot分析表明,c DHP-W1预处理1 h可有效抑制LPS激发的p38、ERK、JNK的磷酸化和IκB、p65的核移位,提示c DHP-W1可通过抑制LPS激活的由TLR4介导的NF-κB和MAPK信号通路,从而抑制巨噬细胞炎性介质的表达与分泌。