富硒多糖胶原蛋白颗粒剂制备及免疫功能研究

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胶原蛋白,是所有多细胞动物体内含量最多的一类蛋白,是结缔组织的重要组成部分,是决定结缔组织韧性的主要因素,在动物细胞中扮演结合组织的角色。富硒多糖能够提高机体巨噬细胞的吞噬功能,对于巨噬细胞的趋化、吞噬和杀灭过程都有不同程度的影响。胶原蛋白活性肽与免疫球蛋白结合可以大幅提高人体的免疫机能,而富硒多糖能刺激免疫球蛋白及抗体的产生,提高巨噬细胞的杀菌能力。本文将胶原活性肽与富硒多糖复配,可以大幅提高人体的免疫力抵抗外来病毒,增强抵抗疾病的能力,从而改善生活质量。本文形成以下研究成果:1.研究了富硒多糖胶原蛋白颗粒剂的制备工艺本文以从鳕鱼皮中提取的胶原蛋白与富硒卡拉胶为主要原料,再配合木糖醇、羧甲基纤维素钠、水等原料,研究了富硒多糖胶原蛋白复方制剂(颗粒剂)的制备工艺过程。通过实验我们探究富硒多糖胶原蛋白颗粒制备的最适条件。定义得粒率(DLL)为干燥后20目与40目标准筛之间的颗粒重量占总颗粒重量的比例。(1)首先通过单因素实验研究各个单因素对得粒率的影响,确定了胶原蛋白肽、富硒卡拉胶与水3个影响较大的单因素。(2)再通过3因素的Box-Behnken试验设计及响应面试验优化原料配比,得到制备富硒多糖胶原蛋白颗粒制剂的最适成分添加量。最终实验结果为:当胶原蛋白肽、卡拉胶、水所占比例分别为23.63%、31.87%、12.87%时得粒率最高。2.研究了富硒多糖胶原蛋白颗粒剂对小鼠的免疫功能利用以上最适条件制备成的颗粒剂,通过对小鼠脾脏系数、胸腺系数、细胞增殖免疫以及小鼠NK细胞活性的研究,综合分析其对小鼠细胞免疫功能的影响能力。主要实验方法是利用脏器/比值测定方法、MTT比色法以及NK细胞活性测定法测试了富硒多糖胶原蛋白颗粒剂对NK细胞增殖状态及活性的影响,结果如下:(1)富硒多糖胶原蛋白颗粒剂多糖水溶液实验小鼠的脾脏指数和胸腺系数与对照组相比均有所提高,随剂量的增加均有一定的升高趋势,表明富硒多糖胶原蛋白颗粒剂在一定程度上可以影响机体免疫功能。(2)富硒多糖胶原蛋白颗粒剂对小鼠的免疫细胞增殖起到显著的促进作用。(3)在效靶比为20:1及50:1时,富硒多糖胶原蛋白颗粒剂提高小鼠的免疫细胞的杀伤力,尤其是小剂量杀伤效果最好。效靶比在50:1的情况下,富硒多糖胶原蛋白颗粒制剂提高两种小鼠的免疫细胞的杀伤力明显高于效靶比为20:1时。(4)增殖和杀伤试验结果表明,富硒多糖胶原蛋白颗粒剂具有一定的增强非特异性免疫功能的作用。将富硒多糖和鳕鱼皮胶原蛋白肽复配,以实验所得的最适成分添加量条件制备成颗粒剂,具有显著增强细胞免疫的功效,达到了我们预期的效果。
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