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目的生物样品的分析是分析领域的一个重要组成部分。与原料药物和制剂相比,生物样品更为复杂:微量药物分布在大量生物介质中,而且生物介质中含有的内源性物质常干扰测定,因此对分析的灵敏度和选择性提出了更高的要求。液质联用技术由于具有灵敏度高、选择性好的特点,已广泛应用于生物样品分析。但是,用液质联用检测化合物时也存在一些难题,如难电离或不电离的化合物灵敏度低,生物基质可能抑制待测化合物在离子源中的电离,产生所谓的基质抑制效应,有些在色谱柱上没有保留的化合物可能受内源性成分的干扰等。本文目的是通过化学衍生化,改变生物样品中分析物的结构,从而改变分析物的物理和化学特性,改善其色谱与质谱行为,提高液质联用检测的灵敏度或使分析物转化成液质联用可检测的化合物,以配合药代动力学研究。方法(1)选择常用的液相色谱衍生化试剂,与含有活泼官能团的化合物,如酚、酮和醛、胺类化合物在溶液中进行衍生化反应,用液质联用检测衍生化产物,考察衍生化反应是否发生,衍生化产物的液质联用可测性及衍生化反应的条件,如缓冲液pH值,衍生试剂浓度,反应温度等。(2)比较生物样品中化合物衍生化前后的色谱行为和质谱行为,评价衍生化试剂在液质联用检测生物样品中化合物的作用。(3)运用衍生化技术建立生物样品中阿魏酸、炔雌醇和4-DMAP的液质联用分析方法,并结合药物代谢研究的需要,开展4-DMAP大鼠与犬的药代动力学研究。结果(1)在溶液中用对甲苯磺酰肼(TSH)和丹磺酰肼(DNSH)衍生化酮和醛,氯甲酸-9-芴基甲酯(FMOC-Cl)和4-氯-7-硝基苯杂茂(NBD-Cl)衍生化胺和氨化合物,丹磺酰氯(DNS-Cl)衍生化酚类化合物,LC/MS检测,结果仅DNS-Cl衍生化单酚羟基化合物获得了成功。(2)筛选出了DNS-Cl衍生化生物样品中单酚羟基类化合物的较通用衍生化条件:缓冲液pH值为10左右,衍生试剂浓度为1 mg·mL-1,反应温度60℃,反应时间为10 min。化合物用DNS-Cl衍生化后,色谱保留时间延长,质谱上表现为分子量增加233,避免了内源性物质的干扰。不论衍生化前化合物是ESI(+)检测模式还是ESI(-)检测模式,衍生化后均为ESI(+)检测模式,灵敏度有不同程度的提高。(3)选择代表性的化合物阿魏酸和炔雌醇,建立了其生物样品的LC/MS定量测定方法。结果表明,灵敏度有一定提高,线性与精密度符合生物样品分析的要求。(4)根据新药申报的需要,用衍生化技术建立了4-DMAP的液质联用定量分析方法,并开展了大鼠和比格犬的药代动力学研究。大鼠单次肌肉注射4-DMAP(15 mg·kg-1),T1/2为8.9±1.2 min,MRT为14.7±1.2 min,Tmax约为7.0 min;比格犬静脉注射4-DMAP(3.25 mg·kg-1),T1/2为5.9±0.8 min,MRT为5.9±2.9 min;比格犬单次肌注4-DMAP(3.25 mg·kg-1),Tmax为8.4±3.5 min,T1/2为13.9±6.4 min,MRT为14.5±4.2 min;比格犬肌注4-DMAP的绝对生物利用度为92.2±39.0%。结论(1)DNS-Cl与单酚羟基化合物的衍生化反应条件易得,操作简单快速,重复性好,衍生物稳定,且质谱信号比衍生化前有极大提高,因此DNS-Cl是用于单酚羟基类化合物液质联用检测的较好衍生化试剂。(2)已建立的衍生化-液质联用法可改善化合物的色谱行为,提高质谱的检测灵敏度。(3)用衍生化-液质联用方法开展了4-DMAP的药代动力学研究,为新药申报提供部分数据。