禽腺病毒（Fowl adenovirus,FAdV）属于腺病毒科禽腺病毒属,分为5个种（A-E）和12个血清型（1-7,8a,8b,9-11）。自2015年来,国内大部分密集养殖地区均有血清4型禽腺病毒（FAdV-4）感染导致的肝炎-心包积液综合征爆发,发病鸡群死淘率可高达80%,严重限制了我国家禽业的可持续发展。然目前对FAdV-4的分子流行变异情况知之甚少,亦无商品化的FAdV-4特异性检测技术用于感染预警及免疫评估。因此,对禽群展开FAdV-4分子流行病学调查,并开发相应的抗原抗体快速诊断方法,将为FAdV-4防控提供流行病学依据和实用工具。1、FAdV-4的分离鉴定及部分序列分析为了解近年来FAdV-4流行分子特征,本研究对2019至2021年送检的疑似FAdV-4感染禽的样品,在LMH细胞进行了病毒的分离与鉴定。经PCR扩增及间接免疫荧光试验（IFA）鉴定,共分离到来自3个省份的6株FAdV-4,分别命名为GD19Duck,GD20Chicken,GDWS20Chicken,JS20Chicken,JSWK20Chicken 及 SD20Chicken。对分离病毒的主要表面结构蛋白Hexon、Penton以及Fiber序列分析发现,分离株Hexon基因与国内流行FAdV-4毒株的核苷酸序列同源性最高（99.8%-100%）,遗传距离近,均为国内新发的高致病性FAdV-4;分离株Hexon、Penton以及Fiber的氨基酸变异特征与国内流行株吻合,另外发现GD19Duck,GDWS20Chicken,JS20Chicken,JSWK20Chicken及SD20Chicken的Fiber-1蛋白中存在A46T突变,预测为潜在的磷酸化位点突变;GD19Duck的Hexon蛋白出现S429N突变,预测为潜在的糖基化位点突变。这些FAdV-4毒株的分离鉴定以及序列特征分析为FAdV-4的防控提供了重要流行病学数据。这些FAdV-4分离毒株中出现的突变可能与FAdV-4疫苗免疫压力及其跨宿主传播过程中发生的适应性突变有关。2、快速检测FAdV-4病毒的胶体金试纸条创制为建立对FAdV-4病毒的快速诊断技术,本研究首先对本实验室保存的针对FAdV-4纤突蛋白Fiber-2不同抗原表位的单克隆抗体进行了纯化,并优化条件组装了检测FAdV-4病毒的双夹心胶体金试纸条。特异性试验表明,该试纸条仅特异地检出FAdV-4,而与其他禽源病毒及禽腺病毒各血清型均无交叉反应。灵敏性试验发现该试纸条检测FAdV-4及Fiber-2蛋白的下限分别为1×105 TCID50/0.1 mL及0.1 μg/0.1 mL。应用检测证明,试纸条可有效检出感染野毒后2-4天的SPF鸡肝组织样品中病毒;对于75份临床组织样品及28株临床分离毒株,试纸条与PCR的检测符合率分别为94.6%和100%。因此,所创制的基于双单抗的检测FAdV-4病毒的试纸条可在10 min内完成现场化诊断,并且快捷、特异,展示了良好的应用前景。3、基于重组荧光病毒的高效FAdV-4中和抗体检测技术研究为实现对FAdV-4中和抗体的快速测定用于疫苗效果评价,本研究利用重组荧光病毒FA4-EGFP作为病毒中和试验（VNT）的靶病毒,直接示踪病毒感染细胞情况,对血清中和抗体效价做出更早、更明确的判定,创制了高效快捷特异检测FAdV-4中和抗体的新型VNT。结果表明,在使用高滴度的2×104 TCID50/50μL靶病毒量时,所构建的基于FA4-EGFP的新型VNT判定时间可提前到24 h,较传统方法提前了 3-5 d。特异性分析表明,该方法仅与FAdV-4阳性血清反应,而与其他禽源病毒及禽腺病毒各血清型的抗血清无交叉反应。该方法检测人工感染FAdV-4后7-28 d采集的抗血清,所测定中和效价与传统VNT滴定有较强的线性相关性（R2=0.9361）,且反应更为灵敏。以该方法测定鸡群免疫FAdV-4灭活疫苗后中和抗体的水平,与传统VNT检测效果保持一致。以上表明所建立的基于FA4-EGFP的新型快捷VNT可替代传统方法,在FAdV-4免疫监测和疫苗评价中具有良好的应用价值。