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第一部分TRIO通过诱导侵袭性伪足形成促进宫颈鳞癌的侵袭转移 研究背景及目的：宫颈癌是女性生殖系统常见恶性肿瘤，高危型 HPV（human papillomavirus,HPV）持续性感染是发病的首要病因。近年来随着以高危型人乳头瘤病毒为基础的宫颈脱落细胞检测的推广，宫颈癌新发病例数较前已经大幅度减少，但是病死率仍然没有得到改善，尤其在发展中国家，宫颈癌所致病患死亡已位列女性肿瘤相关性死亡的第二，甚至发病率和病死率呈现了年轻化的趋势。因此，宫颈癌仍然是威胁病患生存的重要因素。肿瘤的侵袭转移是病患死亡的重要原因，宫颈癌侵袭转移具有一定独特性：国际妇产科联盟分期系统（International Federation of Gynecology and Obstertrics，FIGO）早期宫颈癌病患中已经可能有盆腔淋巴结的转移。宫颈癌淋巴结转移的状态是病患预后的强烈影响因素。肿瘤细胞侵袭转移能力的获得依赖于肿瘤细胞基因组的相应改变。为了探索宫颈癌中基因组拷贝数变异的特征，前期本研究组利用人类全基因组CGH芯片筛选出5p15高频扩增片段。本研究验证该高频扩增片段，得到目标基因TRIO,并探索 TRIO基因在宫颈癌中的作用以及相关机制。 材料和方法：收集经病理诊断的宫颈癌组织作为病例组，以及因妇科良性疾病切除的正常宫颈组织作为对照组。提取组织的DNA、RNA，用real-time PCR的方法验证5p15上基因拷贝数变化，以及mRNA表达情况。免疫组化探讨TRIO在宫颈癌及正常宫颈中的表达差异，并分析 TRIO表达对病患预后的影响。构建TRIO siRNA，转染宫颈癌细胞系-SiHa细胞，划痕，TRANSWELL检测其对细胞侵袭转移的作用，荧光标记鬼笔环肽骨架染色检测细胞骨架变化，Western blot检测下游通路靶蛋白的变化，利用薄荧光明胶包埋爬片检测侵袭性伪足的形成，利用免疫荧光 cortactin荧光染色检测侵袭性伪足成熟。 结果：在宫颈癌组织和正常宫颈组织DNA中，发现TRIO基因的拷贝数扩增频率最高。利用FISH检测基因组拷贝数证实TRIO在宫颈癌组织的扩增。在表达水平上，mRNA和蛋白水平都显示宫颈癌组织中的 TRIO表达高于正常宫颈（p<0.05）。分析TRIO表达与各个级别宫颈癌以及预后关系结果显示，TRIO高表达与宫颈癌的进展以及宫颈癌淋巴结转移相关。在多因素生存分析中显示TRIO可能作为一个独立的预后因子。构建并合成TRIO-siRNA，在SiHa细胞中的验证发现下调TRIO的表达后，细胞侵袭迁移能力下降。细胞骨架的染色显示沉默TRIO以后SiHa细胞骨架变得松散。下调了TRIO以后侵袭性伪足形成减少，成熟也减少。探索 TRIO影响侵袭性伪足形成的下游因素，发现分别下调TRIO下游Rac1和RhoA,侵袭性伪足的形成以及成熟均受到影响。Western blot检测下游通路蛋白发现 TRIO分别通过 TRIO/Rac1/PAK1和TRIO/RhoA/Rock/MT1-MMP两条通路影响侵袭性伪足的形成以及成熟。 结论：TRIO过表达通过TRIO/Rac1/PAK1和TRIO/RhoA/Rock/MT1-MMP通路诱导侵袭性伪足的形成诱导宫颈癌的侵袭转移。 第二部分FOXP3，WNT4基因多态性与子宫内膜异位症相关性研究 研究背景及目的：子宫内膜异位症（内异症，EMs）是内膜组织在子宫腔以外种植。流行病学调查，约有5％-10%的育龄期妇产受其影响，更有高达50%的不孕症的妇女罹患内异症。子宫内膜异位症常常导致痛经，慢性盆腔疼，性交痛以及继发性不孕。现有研究表明有内异症家族的妇女罹患内异症的风险比无家族史的增加了近5倍。尽管内异症的病理过程仍不清楚，但是认为内异症是一种有环境，遗传以及环境和遗传相互作用的多因素疾病。近年来，内异症 GWAS研究发现了一批与内异症发生发展相关的遗传标记，其中包括免疫相关基因 FOXP3，女性生殖道发育相关基因WNT4等。之后多项研究在不同人群中验证这些点。但是却没有得到一致的结果。因此，本研究采用候选法，在中国人群中对FOXP3和WNT4基因多态性与内异症的关联进行探索。 材料和方法：抽取符合要求的病患外周血，存于 EDTA-Na的采血管中。利用Quickgene DNA全血试剂盒提取白细胞的基因组DNA。应用MassARRAY-IPLEX技术和机制辅助激光解吸电离飞行时间质谱平台对314例子宫内膜异位症患者和358例正常对照进行FOXP3基因分型。利用Taqman探针基因分型技术对646例子宫内膜异位症患者和766例正常对照进行WNT4基因分型。 结果：对FOXP3基因，内异症组和对照组 rs2280883位点存在 C/T多态性,rs3761548存在A/C多态性rs3761549存在C/T多态性。与对照组相比，内异症组rs2280883,rs3761549的三种基因型CC,CT,TT分布（P=0.770，OR=0.960；P=0.923,OR=1.013）和等位基因 C,T频率（P=0.772，OR=0.960；P=0.925，OR=1.013）差异均无统计学意义；同时，位点rs3761548的3种基因型AA,AC,CC分布（P=0.762，OR=0.958）和等位基因 A,C频率（P=0.715，OR=0.950）在内异症组和对照组间的差异亦无统计学意义。按照r-AFS分期，将内异症组分成I-II期和III-IV期。在内异症I-II期和内异症III-IV期患者中，rs2280883，rs3761549基因型 CC,CT,TT分布（P=0.454，OR=1.198,P=0.526，0R=0.909；P=0.220，OR=0.750，P=0.548，OR=1.094）和等位基因 C,T分布（P=0.473，OR=1.215，P=0.532，OR=0.912；P=0.204，OR=0.737，P=0.558，OR=1.089），分别与对照组比差异无统计学意义。同样，rs3761548位点3种基因型AA,AC,CC（P=0.431，OR=1.211；P=0.508，0R=0.905）和等位基因A,C（P=0.417，OR=1.226；P=0.516，OR=0.908）分别在内异症两种分期患者中的分布与对照组相比差异无统计学意义。对WNT4基因，探索了rs7521902（A/C），rs16826658（G/T），rs7515106（C/T） and rs2235529（A/G）。rs2235529与内异症的发病相关(p=1.80E-03，odds ratio[OR],95% confidence interval[CI]=1.311,1.129-1.522)，尤其是分级为Ⅲ/Ⅳ的病患。其余的三个点均是阴性结果。对于四个点在不孕方面的分析，发现没有关联存在于内异症相关性不孕和原发不孕以及正常对照组之间。 结论：FOXP3基因的rs2280883，rs3761548和rs3761549位点多态性可能与华中地区妇女子宫内膜异位症发病风险及内异症严重程度无关。WNT4 rs2235529多态性与中国华中地区妇女子宫内异症发病风险相关。