骨髓间充质干细胞移植干预C6胶质瘤的MR研究

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目的:  采用 7.0T磁共振T2加权成像(T2WI)联合磁共振频谱(MRS)序列检测骨髓间充质干细胞(BMSC)移植干预 C6 胶质瘤模型大鼠,了解 BMSC 移植前、后脑胶质瘤磁共振图像及代谢物的变化,探索干细胞瘤内移植后的迁徙及其对C6胶质瘤的影响。  方法及材料:  贴壁法培养C6胶质瘤细胞及BMSC;构建SD大鼠C6胶质瘤模型并随机分成三组,分好后根据瘤内注射不同细胞或生理盐水(NS)命名为:铁蛋白重链基因-绿色荧光蛋白基因双标记的BMSC(FTH-GFP-BMSC)组(注射 10ul 的 FTH-GFP-BMSC悬液)、BMSC组(注射10ul的BMSC悬液)、NS组(注射10ul的NS);在移植前、移植后第3天、移植后第7天,利用7.0T磁共振T2WI观察肿瘤改变,联合MRS序列检测肿瘤中央区及边缘区代谢物变化。MRS原始数据通过LCModel软件进行后处理得出各代谢物浓度值,统计方法采用重复测量方差分析,对比三组大鼠肿瘤中央区及边缘区在移植前后代谢物的变化。磁共振检测完后取出大鼠脑组织做病理苏木精-伊红(HE)染色及普鲁士蓝染色。  结果:  在T2WI中,FTH-GFP-BMSC组移植后第3天肿瘤中央区内可见到呈结节状低信号聚集,移植后第7天在肿瘤边缘区可见环状低信号聚集。MRS检测结果:三组肿瘤中央区:N-乙酰天冬氨酸(NAA)、肌醇(Ins)、谷氨酸(Glu)、胆碱复合物(甘油磷酸胆碱+磷酸胆碱)(Cho(GPC+PCh))浓度随着时间改变呈下降趋势,脂质(Lip)、乳酸(Lac)浓度呈上升趋势;FTH-GPC-BMSC组的PCh浓度低于NS组(P<0.01)、GPC浓度高于NS组(P<0.05);BMSC组与NS组、FTH-GFP-BMSC组与BMSC组的PCh、GPC浓度差异无统计学意义(P>0.05);三组之间Cho(GPC+PCh)浓度组间差异无统计学意义(P>0.05)。肿瘤边缘区:葡萄糖(Glc)浓度呈上升趋势; FTH-GFP-BMSC组、BMSC组PCh浓度低于NS组( P<0.01,P<0.05), GPC浓度高于NS组(P<0.01),而FTH-GFP-BMSC组与BMSC组PCh、GPC浓度差异无统计学意义(P>0.05);三组之间Cho(GPC+PCh)浓度组间差异无统计学意义(P>0.05)。但以上代谢物均无交互效应。病理 HE 染色证实胶质瘤造模成功;普鲁士蓝染色中观察到环绕肿瘤边缘一圈的被染成蓝色的FTH-GFP-BMSC。  结论:  BMSC 移植后 7 天内可以在原位肿瘤内存活,FTH-GFP-BMSC 原位移植入脑胶质瘤中央区后在胶质瘤边缘部分形成低信号区,表明FTH可作为干细胞内源性标记基因并能用磁共振示踪;结合病理图片证实移植入肿瘤中央区的FTH-GFP-BMSC迁徙、聚集在肿瘤边缘区,提示移植后 BMSC 具有自动寻找并聚集于肿瘤边缘的能力,具有肿瘤边缘趋向性。FTH-GFP-BMSC组、BMSC组及NS组三组之间肿瘤中央区及边缘区各代谢物浓度变化幅度没有差异,说明一定量的BMSC在一定时间内对C6胶质瘤的代谢物变化趋势没有明显影响;其中Cho(GPC+PCh)浓度变化差异无统计学意义,则提示移植后BMSC没有起到促进胶质瘤增殖、生长的作用。而实验组PCh浓度低于对照组,GPC浓度高于对照组,提示干细胞存在减缓胶质瘤进展可能。  绕肿瘤边缘一圈的被染成蓝色的FTH-GFP-BMSC。  结论:  BMSC 移植后 7 天内可以在原位肿瘤内存活,FTH-GFP-BMSC 原位移植入脑胶质瘤中央区后在胶质瘤边缘部分形成低信号区,表明FTH可作为干细胞内源性标记基因并能用磁共振示踪;结合病理图片证实移植入肿瘤中央区的FTH-GFP-BMSC迁徙、聚集在肿瘤边缘区,提示移植后 BMSC 具有自动寻找并聚集于肿瘤边缘的能力,具有肿瘤边缘趋向性。FTH-GFP-BMSC组、BMSC组及NS组三组之间肿瘤中央区及边缘区各代谢物浓度变化幅度没有差异,说明一定量的BMSC在一定时间内对C6胶质瘤的代谢物变化趋势没有明显影响;其中Cho(GPC+PCh)浓度变化差异无统计学意义,则提示移植后BMSC没有起到促进胶质瘤增殖、生长的作用。而实验组PCh浓度低于对照组,GPC浓度高于对照组,提示干细胞存在减缓胶质瘤进展可能。
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