论文部分内容阅读
本文在对黄颡鱼肠道菌群进行分析的基础之上,从中筛选能够对淡水鱼类常见致病菌有较强拮抗作用的潜在益生菌菌株,并对其特性进行研究,同时评估其在饲料中添加投喂对黄颡鱼生长、免疫和肠道菌群的影响,以期为益生菌在黄颡鱼配合饲料中的应用提供科学依据。主要结果如下：(1)对黄颡鱼肠道及所处水体菌群的数量和组成进行了分析。结果显示,黄颡鱼各肠段中好氧和兼性厌氧菌数量(对数值)分别为5.27±0.74、6.26±0.36、7.56±0.61。厌氧菌数量比好氧和兼性厌氧菌数量高2-3个数量级,优势菌群为双歧杆菌(Bifidobacterium)。养殖水体中细菌数量(对数值)为4.80±0.73。黄颡鱼肠道好氧和兼性厌氧菌与养殖水体中的优势菌群基本相同,均为气单胞菌属(Aeromonas)、肠杆菌科(Enterobacteriaceae)和不动杆菌属(Acinetobacter)。此外,对患细菌性出血病的黄颡鱼肠道菌群的研究结果显示,患病鱼肠道细菌数量显著增加,气单胞菌相比健康黄颡鱼增加18.3%-33.6%,细菌种类明显减少。(2)采用脑心浸液培养基(BHI)从健康的黄颡鱼肠道分离到65株芽孢杆菌,平板点种法初筛获得53株能抑制淡水鱼类常见致病菌(柱状嗜纤维菌Cytophaga columnaris、迟钝爱德华氏菌Edwardsiella tarda、嗜水气单胞菌Aeromonas hydrophila、温和气单胞菌Aeromonas sobria、大肠杆菌Escherichia coli)的拮抗菌株,其抑菌圈直径范围为6.9-20.5(mm)。对抑菌活性较强的9个菌株用牛津杯法复筛获得3株拮抗菌,其对6株指示菌均有较强的拮抗作用。API 50CHB鉴定它们为枯草芽孢杆菌。选取F14进一步研究其温度耐受性、酸度耐受性、抗生素敏感性、代谢粗提物抑菌活性和在饲料中的存活率。结果显示：菌株F14在90℃水浴5min后存活率为95.3%左右,100℃水浴5min后存活率为52.97%,10min后存活率为8.26%；在pH3.0-5.0的范围内,处理1h后的存活率达到98%以上；处理2h后的存活率也可以达到87%以上；对15种药物药敏试验结果表明,F14对8种药物非常敏感,对4种药物较为敏感,而对3种药物不敏感；F14代谢粗提物具有较强的抑菌作用。病原性嗜水气单胞菌在粗提物中培养2h,细菌数量就开始急剧下降,至24 h时己检测不到活的菌体。此外,将F14喷洒在饲料中,分别存放于室温、4℃和-20℃条件下,10d后F14的存活率分别为：75.26%、87.42%和94.23%,20d后的存活率分别为：57.73%、77.53%和87.63%。(3)以基础饲料为对照组(A0),在养殖系统中进行为期60d的饲喂实验,研究饲料中添加107cfu/g (A1)、108cfu/g (A2)和109cfu/g (A3)的枯草芽孢杆菌F14对黄颡鱼生长、免疫和肠道菌群的影响。结果显示,不同浓度的F14均能提高黄颡鱼的生长性能,其中,A2组相对增重率和特定生长率最高(P<0.05),饵料系数最低。F14能够不同程度地提高黄颡鱼血液白细胞吞噬活性、溶菌酶活性、血清髓过氧化物酶(MPO)的活性和血清补体活性。与对照组相比,摄食F14后黄颡鱼肠道气单胞菌和大肠杆菌数量显著降低(P<0.05),芽孢杆菌的数量随投喂时间的延长显著增加(P<0.05),然后稳定在一个较高的水平,好氧和兼性厌氧菌数量也发生较大变化。结果表明,F14能够调节肠道菌群,激活黄颡鱼免疫防御体系,提高抗病力,促进生长。