论文部分内容阅读
目的:侧脑室扩张是胎儿中枢神经系统异常的主要表现之一,也是早产的一个诱因。有研究表明微生物能调控胎儿大脑的正常发育,胎儿直接接触的羊水菌群可能与其侧脑室扩张相关。因此本研究收集了妊娠中期的孕妇羊水和皮肤样本,主要研究以下两个问题:（1）妊娠中期孕妇羊水微生物中哪些菌是皮肤来源,哪些是非皮肤来源。（2）重度侧脑室扩张胎儿羊水微生物与健康胎儿羊水微生物组成的差异,再分析得到的差异菌中哪些是皮肤来源菌,哪些是非皮肤来源菌。方法:本研究共招募47名2018年就诊于青岛市妇女儿童医院的妊娠中期志愿者,其中10例胎儿被诊断为重度侧脑室扩张,这10例患病胎儿中的4例因染色体异常被排除,最终剩余的6例患病样本和37例健康样本入组研究。本研究纳入羊水样本43份,皮肤样本23份及环境样本5份。环境样本用作背景菌对照组,皮肤样本用作阳性对照组。通过实时定量聚合酶链式反应技术（Real-Time Quantitative Polymerase Chain Reaction,qPCR）及16S Ribosomal Ribonucleic acid（r RNA）测序技术得到了各组微生物总量和菌群组成。接着通过生物信息学方法比较三组样品共有和特有的操作分类单元（Operational Taxonomic Unit,OTU）和菌,由此推测羊水菌群的来源,并使用Wilcoxon秩和检验比较了胎儿健康孕妇和胎儿重度侧脑室扩张孕妇的羊水微生物组成的差异。结果:（1）qPCR结果显示羊水样本中存在细菌基因拷贝数,该拷贝数低于皮肤样本中的细菌基因拷贝数。（2）羊水、皮肤和环境共有的OTU有96个,羊水和皮肤共有而在环境中不存在的O TU有136个,羊水独特的OTU有106个。在所有样本中,栖水菌属（Enhydrobacter）,约氏不动杆菌（Acinetobacter johnsonii）和溶血葡萄球菌是出现率最高的三种菌。（3）羊水样本中皮肤来源的菌有47个,包括柔嫩梭菌（Akkermansia muciniphila）、乳酸杆菌（Lactobacillaceae）、双歧杆菌（Bifidobacterium）、绿脓杆菌（Pseudomona s aeruginosa）、副流感嗜血杆菌（Haemophilus parainfluenzae）、Lactococcus、Sphi ngomonas、Delftia、Microbacterium、Burkholderia、Devosia、毛螺菌科（Lachnospira）、Rubellimicrobium、1-68、Rothia、Dorea、Pedobacter、Pelomonas、Planomicrobium、Pediococcus、Fusobacterium、Brevibacterium、Tepidimonas和Thermus等。其中毛螺菌科（Lachnospira）和罗氏菌属（Rothia）已被证明与婴儿的哮喘相关。羊水中非皮肤来源的属有19个,包括:Alistipes、Anaerostipes、CandidatusKori bacter、Capnocytophaga、Cetobacterium、Coprobacillus、Dyadobacter、Epulopiscium、Megamonas、Moraxella、Nocardioides、Pseudonocardia、Pseudoxanthomonas、Rhodob acter、Rikenella、Rubrobacter、Salinicoccus、Sphingobacterium和Tetrathiobacter。其中Anaerostipes曾被报道能帮助婴儿避免对牛奶发生过敏反应。莫拉菌属（Moraxella）是口腔中的共生菌。（4）胎儿重度侧脑室扩张的羊水中12个菌属发生了显著差异（P＜0.05）丰度升高的属包括Thermus、Kaistobacter、Pelomonas、Microbacterium、Alicyclobacillus、DA101、Exiguobacterium、Lysobacter、Moraxella、Pseudoxanthomonas和Sphingobacterium。丰度降低的属为益生菌Roseburia。Moraxella、Pseudoxanthomonas和Sphingobacterium为非皮肤来源菌,其余菌都在皮肤样本中被检测到。Exiguobacterium、Lysobacter、Ps eudoxanthomonas、Moraxella、Pseudoxanthomonas和Sphingobacterium均有人类炎症疾病相关报道。（5）36个OTU在胎儿重度侧脑室扩张的羊水中丰度显著升高（P＜0.05）,16个为皮肤来源菌,14个为非皮肤来源菌,9个在羊水、皮肤和环境三组样本中都有检测到。其中包括能够引起炎症感染注释到Prevotella和Aerococcaceae的OTU。结论:（1）羊水中柔嫩梭菌、乳杆菌及双歧杆菌等益生菌以及绿脓杆菌和副流感嗜血杆菌等机会致病菌可能来源于皮肤,Anaerostipes菌及二氧化碳噬纤维菌等为非皮肤来源菌。（2）胎儿重度侧脑室扩张与羊水中Exiguobacterium、Prevotella和Moraxella等机会致病菌感染相关,这些菌既有皮肤来源的,也有身体其他部分来源的。（3）羊水菌群可能通过上调孕妇或胎儿炎症反应来诱导胎儿重度侧脑室扩张。