流式细胞术作为单细胞水平上帮助揭示细胞群体异质性的重要分子生物学研究手段,已成为研究细胞群体基因表达情况使用最为广泛的技术。而单分子荧光原位杂交技术作为细胞或组织水平上研究基因定位和表达情况的新方法,也逐渐被越来越多的研究者所认可。本文旨在将流式细胞术和单分子荧光原位杂交技术相结合,开发出一种新型流式细胞RNA检测技术并将其应用于单细胞水平上的高通量多参数基因检测分析。首先,我们从基于锁式探针与滚环扩增技术的单分子RNA荧光原位检测技术出发,借助流式检测平台并以K562细胞作为检测模型,建立了新型流式细胞RNA检测技术的实验方案并对其各项关键反应条件进行优化。然后,我们在U937细胞系上证实通过增加每个基因的锁式探针数量可以有效地提高检测效率,增加该方法的检测灵敏度,并且结合细胞荧光镜检图和流式检测结果,我们大致估算出本技术的检测最低阈值约为10 copies/cell。接着,我们将K562细胞系进行巨核化诱导,通过对巨核细胞的生物标志基因进行单重及双重检测,成功证明了我们能够利用本技术更加直观地观察到基因表达水平在诱导前后发生的变化。此外,通过在K562细胞系诱导前后对microRNA-223以及circRNA-LYN的表达水平变化的成功检测,也进一步验证了我们的方法可以应用于非编码RNA的检测。最后,我们尝试了对RNA与蛋白质进行双重检测,实验结果表明对于RNA的检测方面与前述实验结果具有较好的一致性,而对于蛋白质的检测方面可能受限于本实验方案中对细胞进行固定、透化处理所使用的化学试剂,导致其结果产生一定程度的假阳性信号。综上所述,现有的实验结果均证明本技术具有较高的检测效率、特异性以及灵敏度。我们的技术能够在单细胞水平上对mRNA和非编码RNA进行定量检测分析,同时在RNA与蛋白质的双重检测中也取得了较为理想的实验结果。因此,今后本技术可为单细胞检测领域提供新的思路,有望被更多的研究者所选择,为临床疾病的诊疗开辟新的途径。