目的：胞浆内单精子显微注射(intracytoplasmicsperminjection，ICSI)是利用显微操作仪将单个精子直接注入卵母细胞浆内以建立妊娠的技术，一般适用于由于男性少、弱精或无精引起的不孕症的治疗，本研究在开展此项工作的同时，设计改造了胚胎操作箱，改进了精子制动技术，提高了妊娠率。除此之外，为了降低体外授精-胚胎移植(invitrofertilizationandembryotransfer，IVF-ET)技术中多胎妊娠的发生率，制订了一系列的胚胎评价标准，提高了单胚妊娠率，减少了胚胎的移植数量(一般移植2个胚胎)，为今后生殖医学的深入研究提供了临床依据。 方法：选用临床上诊断为重症精子减少症或无精症(睾丸穿刺物中可找到精子)的不孕夫妇共88例，其中50例来自石家庄市妇产医院生殖中心，38例来自上海第二医科大学附属第九人民医院生殖中心，。 卵子获得：应用常规IVF-ET超促排卵方案，适当的时间应用抑制剂，并在抑制后的合适时间开始促排，应用促卵泡激素(FSH/LH)3～6支/天，至卵泡成熟时，肌肉注射HCG后36小时在B超引导下，经阴道穿刺取卵。 所用试剂：HTF(人类输卵管液)、HTF-HEPES(缓冲的人输卵管液)、IVC-ONE(生长液-1)、OIL(油)、SSS(人工代血清)、ISOLATE(改良精子梯度液)、PVP(聚乙烯吡咯酮)、HY(透明质酸酶)均为美国IrvineScientific(IS)公司生产。 卵的处理：在自制的胚胎操作箱(此箱可恒温、恒湿、固定CO2浓度)中进行找卵、洗卵、拆蛋、观察、移植、操作盘的制作等操作。应用人工血清代用品(SSS)代替自体血清进行试剂的配制：HTF+10％SSS：用于洗卵、装卵、拆蛋；IVC-ONE+10％SSS：用于生长和移植； HTF-hepes+10％SSS：用于洗精和显微注射；应用Isolate代替Percoll用于梯度处理精液，以提高精子的回收率，对于精子数太少的进行离心沉淀划线法找精。 显微注射：应用OLYMPUS公司显微操作仪，将轻质矿物油注入双侧管道中以排除气泡，先上holding针，再上ICSI针，精子置于10％聚乙烯吡咯酮(polyvinypyrrolidone，PVP)溶液中制动后注入到成熟的卵母细胞浆内，每次可以制动2～3个甚至4个精子一起吸入ICSI针中，分别注入每个卵母细胞中，这样可以一次将一个液滴中的卵母细胞全部注射完成，节省时间，降低对卵的损伤。 胚胎移植：注射后14～18小时观察受精情况，将受精卵和未受精卵分开培养，同时记录原核等级，微滴培养38～45小时观察有无2～4细胞胚胎形成，应用自制的胚胎评价标准对胚胎进行评价后选取优质胚胎行胚胎移植术，≤35岁移植2个胚胎，＞35岁移植3个胚胎，在B超监测下移植胚胎至宫腔。 妊娠标准：胚胎移植后11～14天检测血中HCG浓度＞5.0U/L，移植6～7周用B超检测宫内有无胚囊、心博，见胚囊、心博为临床妊娠。 结果：本研究在改装的婴儿保温箱中进行一系列卵的操作，在试剂应用、操作手法和胚胎评价上均进行了改进，大大提高了妊娠率，其中石家庄市妇产医院组，患者年龄29～47岁，共50个周期，获卵775个，平均得卵数15.5个/周期，其中成熟卵605个占78.1％，受精卵440个，受精率72.7％，发育成胚胎数为393个，占89.3％，优质胚胎数318个，占80.9％，临床妊娠24个，妊娠率48％，双胎6例，三胎4例，多胎率41.7％。上海第二医科大学附属第九人民医院组，患者年龄27～46岁，共38个周期，获卵479个，平均得卵数12.6个/周期，其中成熟卵362个占75.8％，受精卵272个，受精率75.1％，发育成胚胎数为233个，占85.7％，优质胚胎数186个，占79.8％，临床妊娠22个，妊娠率57.9％，双胎4例，多胎率18.2％。 第一组在单精子显微注射技术的应用上我们与山东省立医院[3]的数字相比较，受精率、妊娠率有明显提高，统计学上有显著性差异(P＜0.01)，与广州中山医大第一附属医院[4]的数字相比较，受精率明显提高，统计学上有显著性差异(P＜0.01)，优质胚胎率、临床妊娠率有提高，统计学上有差异(P＜0.05)。 胚胎评价改良组与未改良组指标比较获卵率和优质胚胎率虽无显著性差异，但胚胎评价改良组临床妊娠率有明显提高，从48％提高到57.9％，多胎率下降，统计学有差异(P＜0.05)。 结论：1应用改造的胚胎操作箱进行卵的操作，应用人工血清代用品代替自体血清，采用多精子同时制动，分别注射进行单精子显微注射等方法治疗不孕症，可以显著提高ICSI技术的妊娠率，该技术具有广泛的应用推广价值。 2本研究制订的动态胚胎评价系统有较高的实用价值，能够达到降低移植胚胎数，降低多胎率，提高妊娠率的目的，临床应用价值较高。