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目的:相转变溶菌酶(phase-transited lysozyme,PTL)是溶菌酶经过还原剂的作用发生淀粉样转变而形成的一种类淀粉样蛋白,这种新型材料具有抗菌性能、粘附能力、化学稳定性、良好的生物相容性、纳米级别的尺寸优越性并且表面富含多种官能团,可以进行化学改性如自由基活性接枝和载药等,并且其对游离细菌如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌等具有良好的抗菌效果。目前已有将PTL应用于种植体表面改性和牙本质小管封闭的研究,但尚未有研究报道PTL在根管抗菌治疗方面的应用。以往研究主要为PTL寡聚体在气液表面形成纳米薄膜的应用,尚无PTL产物颗粒粘附和抗菌方面的研究报道,因此本研究将通过合成类淀粉样蛋白PTL,初步探究其在牙本质表面的粘附和抗菌能力,为制备以PTL为基础的根管抗菌剂提供依据。方法:等体积混合溶菌酶和还原剂三(2-羰基乙基)磷盐酸盐(tris(2-carboxyethyl)phosphine,TCEP)制备目标溶液。通过丁达尔效应实验初步判断溶菌酶与TCEP混合后目标溶液内颗粒大小。对经过溶菌酶与TCEP混合后目标溶液处理的盖玻片进行刚果红染色和硫黄素T(The thioflavin T,Th T)染色,分别用光学显微镜(Optical Microscope,OM)和激光共聚焦扫描显微镜(Confocal Laser Scanning Microscopy,CLSM)表征溶菌酶是否发生淀粉样转变。通过透射电子显微镜(Transmission electron microscope,TEM)和原子力显微镜(Atomic Force Microscopy,AFM)表征PTL产物的粒径及表面形貌。收集天津医科大学口腔医院颌面外科门诊拔除的完好无龋坏第三磨牙26颗,使用牙冠制备4mm×3mm×2mm牙本质片,碳化硅砂纸抛光、去除玷污层、消毒并进行高压灭菌。将牙本质片随机分为两组,即对照组和实验组,分别用羟乙基哌嗪乙硫磺酸(4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethan esulfonic acid,HEPES)溶液和PTL溶液处理牙本质片2h,无菌PBS溶液冲洗3次,每次3ml,通过场发射扫描电子显微镜(Field Emission Scanning Electron Microscope,FESEM)观察牙本质片表面材料的形态并评估PTL在牙本质表面的粘附能力;用粪肠球菌(Enterococcus Faecalis,E.facealis)(ATCC 29212)冻干菌株在脑心浸液肉汤(Brain Heart Infusion,BHI)液体培养基中培养获得粪肠球菌悬液,将细菌悬液分别与等体积HEPES溶液和PTL溶液混合2h,通过结晶紫染色法评估PTL对游离粪肠球菌的作用;牙本质表面培养粪肠球菌21天获得牙本质表面生物膜样本,分别用HEPES溶液和PTL溶液处理2h,FESEM观察PTL对粪肠球菌生物膜的作用;孔板内培养粪肠球菌21天获得生物膜,分别用HEPES溶液和PTL溶液处理6h,核酸染色法评估PTL对粪肠球菌生物膜的作用。结果:丁达尔效应实验结果初步证明溶菌酶溶液和TCEP溶液混合后经过静置上清液中颗粒为纳米级别颗粒。刚果红染色可见实验组材料被染液着色,并表现为浅砖红色薄膜和散在分布或凝集成团的深砖红色颗粒;Th T染色显示实验组材料呈薄膜状浅绿色荧光和散在团块状强绿色荧光,以上均表明成功合成类淀粉样蛋白PTL。TEM和AFM结果均可见PTL产物为纳米颗粒,类似球形并相互聚集成链状或网状,且PTL产物颗粒能稳定粘附于硅片表面。牙本质片表面PTL涂层FESEM结果提示反复冲洗后PTL产物颗粒仍可稳定粘附于牙本质羟基磷灰石及胶原纤维表面,部分可进入于牙本质小管。结晶紫染色显示PTL处理组游离粪肠球菌标准菌株发生明显的细菌团块状凝集;经过材料处理的牙本质表面粪肠球菌生物膜FESEM结果表明PTL处理组的牙本质表面粪肠球菌生物膜存在大面积葡萄串珠样细菌凝集现象,并且细菌大量粘附于PTL产物颗粒表面;核酸染色结果显示PTL对粪肠球菌生物膜具有明显的细菌质膜破坏作用,单位面积死细菌数量统计学分析提示PTL处理组单位面积细菌质膜破坏数量明显多于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:本研究成功合成具有淀粉样蛋白特征性结构的PTL,研究发现PTL产物颗粒表现为纳米级并且纳米颗粒呈网状或链状稳定粘附于硅片和牙本质等表面。PTL对游离的粪肠球菌和粪肠球菌生物膜存在明显的细菌凝集作用,并可通过破坏细菌质膜的方式对粪肠球菌生物膜发挥抗菌作用。PTL成本较低、绿色环保并且生物相容性良好,具有纳米级别尺寸、优越的粘附性能和一定的抗菌性能,有望利用其制备以PTL为基础的新型长效根管抗菌冲洗液。