论文部分内容阅读
目的:本实验旨在研究维生素D(Vitamin D,VD)对葡聚糖硫酸钠(Dextran sulfate sodium,DSS)诱导的C57BL/6小鼠溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis,UC)的影响,并初步探讨其对小鼠结肠组织核转录因子κB(Nulear transcription factor-κB,NF-κB)通路的调节作用,为维生素D对UC的营养防治提供理论依据和临床应用指导。方法:将36只6w龄的雌性C57BL/6小鼠随机分为4组,每组9只。分别为:正常对照组,DSS模型组,维生素D低剂量干预组,维生素D高剂量干预组。除正常对照组外,其余三组均给予5%的DSS水溶液自由饮用7d,建立急性溃疡性结肠炎模型。造模前一天开始至造模后一天,维生素D低剂量干预组小鼠每天给予50ng/kg.bw1,25-(OH)2D3灌胃,维生素D高剂量干预组小鼠每天给予500ng/kg.bw 1,25-(OH)2D3灌胃,其余两组给予等量溶剂灌胃。造模开始9d处死小鼠,取血清、结肠、脾脏进行检测。根据小鼠一般情况进行疾病活动指数(Disease Activity Index,DAI)评分,对小鼠结肠进行肉眼损伤评分,测量结肠长度,进行结肠组织病理学评分;称取脾脏重量,计算小鼠脾脏系数;酶联免疫吸附测定法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法测定小鼠血清中白介素(Interluekin,IL)-6和肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor,TNF)-α蛋白表达水平;免疫组织化学法测定结肠组织磷酸化IκB激酶β(phosphorylated inhibitor of nuclear factor kappa-B kinaseβ,p-IKKβ)、磷酸化核转录因子κB抑制蛋白(phosphorylated inhibitor of NF-κB,p-IκB)α、NF-κBp65和维生素D受体(Vitamin D Receptor,VDR)蛋白表达情况。结果:1.C57BL/6小鼠溃疡性结肠炎模型建立成功。造模开始3d,造模小鼠出现不同程度的体重减轻,大便不成形,随着时间推移出现稀便、便血等情况,且症状不断加深。与正常对照组小鼠相比,模型组小鼠疾病活动指数明显升高(P<0.05),结肠肉眼损伤评分和病理学评分明显升高(P<0.05)。2.与模型组小鼠相比,维生素D干预组小鼠体重减轻、稀便、便血等情况较轻,疾病活动指数较低。模型组小鼠第7日疾病活动指数明显高于正常对照组(P<0.05),维生素D低剂量干预组第7日疾病活性指数低于模型组(P<0.05),维生素D高剂量干预组第7日疾病活性指数最低(P<0.05)。3.给予维生素D干预后小鼠溃疡性结肠炎结肠损伤有所减轻,维生素D低剂量干预组小鼠结肠组织肉眼损伤评分和组织病理学评分与模型组相比有所降低(P<0.05),维生素D高剂量干预组小鼠结肠组织肉眼损伤学评分和组织病理学评分(P<0.05)更低;模型组小鼠结肠长度与正常对照组小鼠相比明显缩短,维生素D干预组小鼠结肠长度与模型组小鼠相比有所增加。4.溃疡性结肠炎小鼠脾脏受到影响,补充维生素D后有所改善。与正常对照组相比,模型组小鼠脾脏肿胀,重量增加,脾脏系数增加(P<0.05),维生素D干预组小鼠脾脏系数与模型组相比有所降低(P<0.05)。5.与正常组小鼠相比,模型组小鼠血清炎症因子IL-6、TNF-α蛋白表达水平增加(P<0.05),维生素D低剂量干预组小鼠与模型组相比血清IL-6、TNF-α水平有所下降(P<0.05),维生素D高剂量干预组下降最明显(P<0.05)。6.与正常组小鼠相比,模型组小鼠结肠组织p-IKKβ表达增加(P<0.05),p-IκBα表达增加(P<0.05),NF-κB蛋白水平增加(P<0.05)。与模型组相比,维生素D干预组小鼠结肠组织p-IKKβ表达减少(P<0.05),p-IκBα表达减少(P<0.05),NF-κB蛋白水平减少(P<0.05),维生素D高剂量干预组降低最明显(P<0.05)。结论:1.C57BL/6小鼠的溃疡性结肠炎模型建立成功。2.维生素D干预能减轻溃疡性结肠炎小鼠结肠损伤情况。3.维生素D干预对小鼠溃疡性结肠炎引起的脾损伤起一定改善作用。4.维生素D干预可以抑制溃疡性结肠炎小鼠体内细胞因子IL-6、TNF-α的分泌,起到抑制炎症的作用。5.DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠补充1,25-(OH)2D3后可以抑制小鼠结肠NF-κB通路,这种抑制是通过降低结肠组织IKK磷酸化,从而减少IκB磷酸化,最后减少NF-κB活化实现的。