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HBV相关性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)通常在慢性炎症坏死性肝病(包括肝硬化和慢性肝炎)的基础上发生，其癌变机制目前仍不明确。本试验旨在通过应用双向凝胶电泳和质谱技术，分析HBV相关性HCC癌组织与非癌肝组织蛋白质组之间的差异，鉴定肝组织蛋白质组中与HCC癌变相关的蛋白。 研究方法 1．样品选择与进行2-DE前的样品处理：18例HBV相关性HCC患者手术切除的癌组织和癌周组织，其中癌组织标本18例，癌周组织中，肝硬化组织标本12例，慢性肝炎组织6例。组织裂解液溶解肝组织，低温高速离心后吸取上清，经比色法测定蛋白浓度后置于-70℃冰箱中保存备用。 2．2-DE与凝胶图像分析：第一向固相pH梯度等电聚焦，随后在平衡液中平衡30min，接着进行第二向SDS-PAGE电泳。用硝酸银溶液银染使凝胶中的蛋白质点可视化。LabScan扫描凝胶成像，ImageMaster2D软件对癌组织、肝硬化和慢性肝炎组织凝胶进行蛋白质点的差异分析，选定感兴趣的差异蛋白质点。 3．MALDI-TOF肽质量指纹图谱与数据库搜索：切取凝胶内的目标 博士学位论文 中文摘要差异蛋白质点，经脱色、还原和烷基化，TPCK一胰蛋白酶酶解。以ZipTip＊＊Cls吸头对样品进行脱盐，Pr＊Flex＊＊IllMALDITOF－MS测定其胶内酶解后的肽质指纹图谱，用Peptldent 软件查询SWISS－PROT／TrEMBL数据库（http：／／ www．exPasy．org）。 研究结果 1．差异分析：成功建立应用双向凝胶电泳分离肝组织蛋白质的方法，测得癌组织图谱平均每张蛋白斑点数为门 士 51）个，肝硬化组织图谱平均蛋白斑点数为门188士41）个，慢性肝炎组织图谱平均蛋白斑点数为门235士31）个。当某一蛋白质点在某一类型组织凝胶中表达较其他类型组织凝胶明显增强（校正后蛋白质点的表达量相差3倍以上人 并在不少于 50 ％的该类组织凝胶图谱中表达，视其为差异蛋白质点。肝硬化组织VS癌组织，在癌组织凝胶中发现19个差异蛋白质点，在肝硬化组织凝胶中发现差异蛋白质点16个；慢性肝炎肝组织VS癌组织，在癌组织凝胶中发现21个差异蛋白质点，在慢性肝炎组织凝胶中发现差异蛋白质点 17个。癌组织 VS癌周组织（肝硬化组织十慢性肝炎组织人在癌组织凝胶中发现14个差异蛋白质点，在癌周组织凝胶中发现差异蛋白质点12个。 2．差异蛋白质点的鉴定：选取上述差异蛋白质点进行质谱分析，获得28张PMF，初步鉴定了其中的17张PMF。其中CDC27HS蛋白’、胰岛素刺激蛋白激酶1、甲胎蛋白前体、核纤层蛋白BI、细胞骨架蛋白8、Gankyrin、核仁磷酸化蛋白B23＼胞浆纤维蛋白重链、c刁un氨基 IV 博士学位论文 中文摘要端激酶2n、ADP／ATP运输蛋白忖等10个蛋白质点，在癌组织20E凝胶图谱中表达明显增高涨＊蛋白仅为癌组织VS慢性肝炎组织中的差异点蛋白质卜周期素依赖性激酶抑制蛋白12…16INK4A人周期素依赖激酶抑制蛋白1…21人抗氧化蛋白2＼二硫化蛋白异构酶AZ＼Cl一四氢叶酸合成酶＼Rho七TPase一激活蛋白4＼胰岛素样生长因子结合蛋白2“（带入标记蛋白仅为癌组织VS肝硬化组织中的差异点）等7个蛋白质点在癌周组织中表达明显增加。带个标记蛋白质在既往文献中未曾报道其与HCC相关。 研究结论 1．通过该研究成功地建立了一套包括双向凝胶电泳、凝胶图像分析、MALDI丁OF sk质量指纹图谱和蛋白质鉴定数据库搜索的肝组织蛋白质组的实验方法。 2．HBV相关性HCC的癌组织、肝硬化组织、慢性肝炎组织蛋白质组之间存在较明显的差异，表明慢性肝炎基础上发生的癌变与肝硬化基础上发生的癌变，其癌变机制存在差别。对本试验研究中初步鉴定出的差异蛋白质，尤其是既往文献中未曾报道与HCC相关的蛋白质，有助于研究HBV相关性HCC的癌变机制、肿瘤标记和治疗靶标。