鳕鱼皮明胶的止血效果及复合止血粉的研究

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鳕鱼是一种资源丰富、分布较为广泛的海水鱼类,是全世界年捕捞量最大的鱼类之一,具有重要的食用和经济价值。随着我国水产品加工行业的发展,以鱼皮为主的水产品加工下脚料的高值化利用成为研究热点。本研究课题选用了鳕鱼皮为原料,在65℃条件下,采用热水提取法从鳕鱼皮中提取出水溶性明胶,并对其进行鉴定和理化性质分析,研究明胶的分子量与止血活性之间的关系,并在此基础上制备出一种复合止血粉,并研究其止血性能与机理。1、通过测定鱼皮和提取液中的羟脯氨酸含量计算出了文中的提取条件下明胶的提取率为39.87%,紫外光谱表明明胶样品具有较高纯度,明胶样品的粘度随温度的升高逐渐下降,样品的凝胶强度要低于哺乳动物源明胶,金属离子含量测定结果表明,鳕鱼皮明胶中的钙含量要明显高于哺乳动物和鳗鱼、鲢鱼等其它水产鱼类,揭示了鳕鱼皮明胶作为止血材料原料的一大优势。2、通过SDS-PAGE电泳确定了鳕鱼皮明胶的分子量分布范围,由于明胶是一种非均一的蛋白水解产物,因此其相对分子质量分布范围较为广泛,为不同分子量明胶的分离提供依据。采用超滤法,选取100KDa和50KDa的超滤膜对样品进行超滤处理,得到高、中、低三个分子量范围的明胶样品。为测定不同分子量明胶的止血效果,建立了大鼠断尾实验模型、大鼠股动脉止血实验模型和大鼠肝创面止血实验模型,测定结果表明随明胶分子量的下降,出血时间和出血量上升,高分子量的明胶样品止血效果最好。这一结果为明胶类止血材料的开发提供了重要依据。3、选用上一部分实验筛选出的高分子量明胶为原料,选取了三种具有止血效果的海洋多糖类物质——壳聚糖、羧甲基壳聚糖、海藻酸钠分别与明胶按照一定比例复配,制备出明胶复合止血粉。根据吸水性能测定结果,选出了明胶:壳聚糖为10:4、明胶:羧甲基壳聚糖为10:8、明胶:海藻酸钠为10:4的三种复合止血粉作为研究对象进行止血效果研究。溶血率实验结果表明,止血粉的溶血率均在国家要求的安全范围内,体外止血实验结果表明复合止血粉具有促凝效果。进一步进行动物实验,结果表明明胶与三种海洋多糖之间发生协同作用,与明胶相比止血效果均有提高,其中明胶·壳聚糖组的效果最好。4、通过测定活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)判断明胶和明胶复合止血粉对内源性凝血系统、外源性凝血系统和共同凝血途径的影响,结果表明明胶可以缩短活化部分凝血活酶时间,从而影响内源性凝血系统,缩短凝血时间。血小板聚集实验表明明胶能够促进血小板的聚集,明胶与壳聚糖和羧甲基壳聚糖存在协同作用,其中明胶-壳聚糖组促进血小板聚集的效果最好。血小板释放活性因子PF4、P-选择素和TXB2的测定结果表明,明胶可以促进三种活性因子的释放量,明胶与海洋多糖的复合对各活性因子都有不同程度的协同作用。对内源性凝血系统、血小板聚集和血小板活性因子释放量的作用共同促进了血液凝固,起到快速止血的作用。
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