前体mRNA剪接由一个巨大且高度复杂、动态的蛋白复合体—剪接体催化完成。剪接体是由五种核小RNA(U1、U2、U4、U5和U6)和上百种蛋白质组成的核酸蛋白复合体。U4/U6.U5三联体作为剪接体中最大的核酸蛋白复合体亚结构在剪接体组装及剪接过程中发挥着重要的作用。在三联体中,最重要的三个蛋白Brr2、Snu114、Prp8间的互相作用对于抑制Brr2的解旋酶功能、维持三联体的稳定至关重要。三联体相关蛋白Sad1对于维持三联体的稳态具有重要作用,同时也有文献指出,Sad1在招募三联体到复合体A的过程中起重要作用,但是Sad1的具体作用机制未知。我们发现禾谷镰刀菌FgSad1上的突变可以抑制Fgprp4敲除突变体的表型。该论文从研究FgSAD1上的角突变为切入点,研究禾谷镰刀菌FgSad1在剪接体组装过程中的作用机制:通过对320个Fgprp4角变菌株的FgSAD1基因进行测序,鉴定到7个突变位点,在FgSad1的三维结构上大体分布在三个部位。尽管这些角变子的生长速率已完全回复,但是它们的有性生殖和致病力方面均存在缺陷。通过序列比对及蛋白结构预测,7个位点都相对保守,它们的变化没有影响蛋白整体结构,但是P258S、S269P、T324I和A327V突变改变了蛋白内部的氢键。有意思的是,相对于酿酒酵母中的同源蛋白,FgSad1具有一段额外的富含丝氨酸苏氨酸的N端序列。通过LC/M质谱实验,我们鉴定到N端序列上具有四个磷酸化位点,这些位点否是被FgPrp4磷酸化尚无法证明。同时,该N端序列对FgSad1蛋白的功能非常重要,但是与它的亚细胞定位无关。N端敲除突变体生长缓慢、有性和致病力均严重受损,且不稳定,易发生角变。根据它们在FgSad1三维模型上的位置,我们从7个角变位点中选取P258S、S269P、D76N、L512P来研究角变对该蛋白与其他三联体蛋白间互作的影响。通过酵母双杂和Co-IP实验,我们发现P258S、S269P增强FgSad1与FgBrr2的PWI结构域、FgSnu66、FgPrp8的互作,而D76N、L512P减弱FgSad1与FgSnu114的互作。因此我们推测FgSad1在维持三联体的稳态过程中与FgPrp8、FgSnu114和FgBrr2的互作模式是不同的。FgSad1增强与FgPrp8的互作,减弱与FgSnu114的互作有助于维持三联体稳态平衡。综上所述,我们的实验结果说明,在三联体维持稳态的过程中,FgSad1与FgBrr2、FgPrp8的互作关系是增强的,与FgSnu114的互作关系则更加复杂,部分增强部分减弱。同时N端结构对于FgSad1的蛋白功能具有重要作用,对蛋白定位无影响。