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目的： 脂肪干细胞（adipose-derived stem cells，ASCs）因具有良好的成骨分化潜能而常被用作骨组织工程种子细胞。本研究将小鼠ASCs接种于聚谷氨酸苄酯（Polyγ-benzyl-L-glutamate，PBLG）微球，进行成骨诱导后，局部注射干预小鼠股骨骨不连模型。观察由ASCs与PBLG微球构建的可注射性组织工程骨，对小鼠股骨骨不连的修复作用，为骨不连的临床治疗探索新的途径。 方法： 取第三代小鼠ASCs，约以1×107ASCs混合60mgPBLG进行成骨诱导； （1）DiO荧光标记、电镜扫描观察ASCs在PBLG上的粘附、增殖情况。 （2）以未诱导组作为对照，定性和定量方法分别检测碱性磷酸酶（Alkaline Phosphatase，ALP）、细胞外钙盐沉积情况。 （3）于C57小鼠股骨中部造成2mm骨缺损，分别以髓内钉、髓内钉联合“U”型夹的方法进行固定；模型建立后12周通过X线、microCT与组织学检查，观察骨不连模型形成情况。 （4）将ASCs/PBLG组织工程骨0.1ml局部注射于鼠股骨骨不连处（n=5）；单纯注射PBLG微球0.1ml（n=5）、PBS0.1ml（n=5)分别作为对照组，通过X线、microCT及组织学等方法观察骨不连修复情况。 结果： （1）体外成骨诱导14天，DiO荧光标记证明细胞在微载体内生长良好，扫描电镜观察到微载体表面细胞外基质的沉积。与未成骨诱导组相比，成骨诱导后10-14天成骨指标ALP及Ca离子显著增高。 （2）建立2mm小鼠股骨骨缺损，单纯以髓内针固定，骨缺损术后12周骨不连形成率为60％；加用“U”型夹术后12周全部形成骨不连，骨缺损间隙无短缩。 （3）选用髓内针/“U”型夹固定的小鼠骨不连模型，局部注射负载成骨诱导ASCs的PBLG微球，8周后X片显示ASCs/PBLG组骨缺损处双侧均有骨性骨痂相连，MicroCT显示骨缺损处骨性连接，组织学切片显示骨缺损内被成熟骨痂填充。PBLG组及PBS组骨缺损处形成骨不连，两者均未见明显骨痂形成。 结论： 小鼠脂肪干细胞在多孔PBLG微载体上可以良好的增殖及成骨分化，局部注射ASCs/PBLG在小鼠股骨骨不连处能明显的促进骨再生，修复骨不连。