超声联合一氧化氮微泡促进大鼠骨髓间充质干细胞迁移及机制的实验研究

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背景:国内外实验已经证明,超声联合微泡可增效骨髓间充质干细胞归巢能力,一氧化氮(NO)在其中起着重要的作用。   目的:讨论超声联合NO微泡对干细胞迁移能力的影响及其可能机制,以探求NO微泡对MSC归巢的促进作用。   方法:超声联合微泡作用于不同浓度比的左旋精氨酸(L-Arg)双氧水混合物,硝酸还原法检测不同超声辐射强度下非酶化NO的生成量;体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),随机分为超声联合NO微泡组(Ul+NOMb组),超声联合普通微泡组(Ul+Mb组),单纯超声组(Ul组),微泡组(Mb组),空白对照组(CON组),其中Ul+NOMb组根据微泡所占体积百分比再分为三个浓度组,分别是1:70,1:50,1:20三个组,干预后采用MTT比色法检测MSCs增殖,流式细胞仪分析细胞凋亡及细胞周期;Transwell小室检测细胞迁移能力,RT-PCR检测迁移移相关的SDF-1受体CXCR4基因的表达。   结果:(1)Ul+Mb组的非酶化NO生成量较CON组、Ul组及Mb组高(P<0.01),UlMb组中10:1浓度组非酶化NO生成量最高(P<0.01),1.5W/cm2的NO生成量最高(P<0.01);(2)对细胞增殖的影响,Ul+NOMb组中低浓度组(1:50与1:70),与对照组相比无明显统计学差异(P>0.05),1:20浓度组抑制细胞增殖(P<0.01);(3)对细胞凋亡与细胞周期的影响,Ul+NOMb组中1:70浓度组,与对照组相比无明显统计学差异(P>0.05),Ul+NOMb组中1:50与1:70浓度组诱导细胞凋亡(P<0.01),1:50浓度组较1:70浓度组对细胞凋亡的影响小(P<0.01),与UlMb组无明显差异(P>0.05);(4)Ul+NOMb组作用后的MSCs迁移能力较其他各组强,有统计学意义(P<0.01),其CXCR4基因表达同样增强,较其他各组均有统计学意义(P<0.01)。   结论:超声联合微泡可以增效非酶化一氧化氮的生成,L-Arg与双氧水的比例为1:10,超声强度为1.5 W/cm2时效果最佳,超声联合NO微泡作用于MSCs,1:50浓度对其是安全的,并可以增强其迁移能力,原因很可能是增强了CXCR4基因的表达。
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