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背景:国内外实验已经证明,超声联合微泡可增效骨髓间充质干细胞归巢能力,一氧化氮(NO)在其中起着重要的作用。
目的:讨论超声联合NO微泡对干细胞迁移能力的影响及其可能机制,以探求NO微泡对MSC归巢的促进作用。
方法:超声联合微泡作用于不同浓度比的左旋精氨酸(L-Arg)双氧水混合物,硝酸还原法检测不同超声辐射强度下非酶化NO的生成量;体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),随机分为超声联合NO微泡组(Ul+NOMb组),超声联合普通微泡组(Ul+Mb组),单纯超声组(Ul组),微泡组(Mb组),空白对照组(CON组),其中Ul+NOMb组根据微泡所占体积百分比再分为三个浓度组,分别是1:70,1:50,1:20三个组,干预后采用MTT比色法检测MSCs增殖,流式细胞仪分析细胞凋亡及细胞周期;Transwell小室检测细胞迁移能力,RT-PCR检测迁移移相关的SDF-1受体CXCR4基因的表达。
结果:(1)Ul+Mb组的非酶化NO生成量较CON组、Ul组及Mb组高(P<0.01),UlMb组中10:1浓度组非酶化NO生成量最高(P<0.01),1.5W/cm2的NO生成量最高(P<0.01);(2)对细胞增殖的影响,Ul+NOMb组中低浓度组(1:50与1:70),与对照组相比无明显统计学差异(P>0.05),1:20浓度组抑制细胞增殖(P<0.01);(3)对细胞凋亡与细胞周期的影响,Ul+NOMb组中1:70浓度组,与对照组相比无明显统计学差异(P>0.05),Ul+NOMb组中1:50与1:70浓度组诱导细胞凋亡(P<0.01),1:50浓度组较1:70浓度组对细胞凋亡的影响小(P<0.01),与UlMb组无明显差异(P>0.05);(4)Ul+NOMb组作用后的MSCs迁移能力较其他各组强,有统计学意义(P<0.01),其CXCR4基因表达同样增强,较其他各组均有统计学意义(P<0.01)。
结论:超声联合微泡可以增效非酶化一氧化氮的生成,L-Arg与双氧水的比例为1:10,超声强度为1.5 W/cm2时效果最佳,超声联合NO微泡作用于MSCs,1:50浓度对其是安全的,并可以增强其迁移能力,原因很可能是增强了CXCR4基因的表达。