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目的:囊性棘球蚴病(Cystic echinococcosis,CE)是一种由犬细粒棘球绦虫(Echinococcos granulosus,E.g)幼虫引起的严重的人畜共患病,呈世界性分布。人类通过摄入食肉动物粪便中的细粒棘球绦虫虫卵而成为中间宿主,随着病程的延长,绦蚴挤压受累器官、引起组织萎缩和坏死,严重影响人民生活健康,同时感染家畜,造成严重的经济损失。本研究:1)根据"卫生假说"理论基础建立E.g感染合并硫酸葡聚糖(Dextran sulfate sodium salt,DSS)诱导的炎症性肠病(IBD)模型,观察寄生虫感染对肠炎发生发展的影响;2)提取纯化E.g天然的分泌抗原B(native Antigen B,nAgB)和重组抗原B(recombined Antigen B,rAgB),在体外观察抗原B(Antigen B,AgB)对巨噬细胞极化的影响;3)分析AgB对小鼠IBD模型的肠炎症状产生保护性的可能机制,从而为寄生虫分泌抗原在相关疾病的防治中提供理论依据;4)以E.g微囊腹腔注射的继发性感染小鼠为模型,用AgB干预DSS诱导的肠炎模型,分析小鼠肠道菌群在E.g感染状态的改变及其对机体免疫状态的影响和AgB对肠炎模型中肠道微生物基因组丰度和结构组成的影响情况。方法:1)在小鼠继发性E.g感染模型基础上建立DSS诱导的IBD模型,通过体重指标、疾病活动指数(Disease activity index,DAI)、病理学评分指标评价IBD模型的炎症程度及E.g干预效果,将E.g感染小鼠腹腔灌洗液细胞腹腔注射给IBD模型小鼠,评估E.g感染的腹水细胞对肠炎症状的影响;2)从感染细粒棘球蚴的新鲜绵羊肝脏包囊的囊液中提取囊液蛋白,经蛋白的浓缩、沉淀、纯化等步骤获得nAgB;用大肠杆菌诱导表达和纯化获得rAgB;选择RAW264.7细胞和小鼠腹腔巨噬细胞进行体外实验,通过AgB作用观察细胞增殖、分化指标,再用AgB联合脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)干预观察AgB在LPS引起的细胞损伤中的作用及M1型巨噬细胞的炎性因子表达,随后用免疫荧光法观察AgB在巨噬细胞膜的定位,探讨AgB在巨噬细胞可能存在的受体及作用通路;3)预先给予小鼠AgB腹腔注射后,再诱导IBD模型,通过体重、DAI指标、病理学评分指标评价AgB对IBD炎症程度的干预效果,分析各组小鼠腹腔中巨噬细胞比例和结肠固有层淋巴细胞M1、M2型巨噬细胞指标;4)建立小鼠继发性E.g感染模型,100天后收集小鼠新鲜粪便,从粪便中提取基因组DNA并纯化;使用MiSeq 300PE测序平台对DNA文库测序,进行16S rRNA基因的生物信息学和统计分析,进行菌群评估、菌群差异、微生物组功能预测和免疫学相关分析,探讨E.g感染对小鼠肠道微生物群的影响,接着建立AgB干预的IBD模型,同以上所述方法观察并分析AgB干预对IBD鼠肠道微生物结构及功能的影响与改变。结果:1)成功建立了IBD模型,小鼠体重降低,DAI生理学评分明显升高,出现了稀便、血便症状,解剖后结肠组织切片的HE染色可见,结肠上段炎性细胞浸润和组织损伤程度较重,而E.g感染联合IBD组小鼠的体重、DAI指标、病理学评分等指标相较于IBD组均有好转;将E.g感染小鼠腹腔灌洗液细胞腹腔注射给IBD模型小鼠,结果体重指标显著改善;2)分别通过囊液提取和重组表达并经过浓缩、沉淀、纯化等步骤后获得了高纯度、高浓度的nAgB和rAgB,体外实验结果表明AgB并不影响细胞增殖、分化指标,但减轻了LPS引起的细胞损伤及M1细胞的炎性因子表达,共聚焦观察AgB可以锚定在巨噬细胞膜表面,并且可以进入细胞浆内;3)预先给予小鼠腹腔注射AgB再诱导肠炎模型,结果与DSS组相比,AgB+DSS组体重、DAI指标、病理学评分指标评价均出现好转,小鼠腹腔中巨噬细胞比例和结肠固有层淋巴细胞M1、M2型巨噬细胞指标均发生变化;4)通过对继发性E.g感染模型小鼠粪便的16S rRNA分析,所有样本质量满足分析指标,感染组和未感染组的核心菌群分析结果表明,两组共存在的主要类群和核心微生物群变化不大,Lefse分析发现E.g感染增加了两个肠道微生物群菌属:Eisenbergiella和Parabacteroides,与未感染组相比,E.g感染组肠道微生物群的生物素、脂质代谢和色氨酸代谢等七条途径发生了改变,同时E.g感染组肠道细菌组成与抗HCF抗原的IgG抗体水平有很强的相关性;而AgB干预也改变了IBD鼠肠道宏基因组学组成及特征:主成分分析显示AgB注射后诱导肠炎组与PBS诱导的肠炎对照组样品间存在生态差异,在门水平上,各组间菌群丰度无明显差异,但是AgB注射可以逆转IBD状态下的变形杆菌门(Proteobacteria)升高趋势,与拟杆菌门(Bacteroidetes)的降低趋势,在纲的水平上AgB注射后诱导肠炎组样本中鞘脂杆菌纲(Sphingobacteriia)以及变形菌纲(Alphaproteobacteria)显著增多,肠道群落的功能预测显示菌群四条代谢途径及P53信号传递途径也发生显著改变。结论:1)E.g感染明显抑制DSS诱导的肠炎症状,对肠炎具有一定保护作用;2)AgB可以锚定在巨噬细胞膜表面,并且可以进入细胞浆内,减轻了LPS引起的细胞损伤及M1细胞的炎性因子表达;3)AgB抑制了DSS诱导的肠炎症状,腹腔巨噬细胞和结肠固有层M1、M2型巨噬细胞参与对肠炎的保护作用;4)E.g感染后小鼠肠道菌群物种丰富程度增高,可能增高的是一些极低丰度的稀有细菌,这些稀有菌群是否是E.g感染引起的特异性改变、是否会影响肠道或机体免疫状态有待于进一步验证和研究;而AgB干预对IBD鼠肠道菌群在纲、目、科、属等不同水平产生重要影响,结合本课题第二部分结果说明AgB的干预对机体免疫状态的改变,可能影响肠道菌群结构,从而产生AgB对肠炎的保护现象。