【摘 要】
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花生四烯酸（ARA）是由亚油酸和亚麻酸等经过脱氢和碳链延长的反应合成，而此过程中△5脂肪酸脱氢酶可催化此反应，作为ARA合成途径中的限速酶，在反应中起到了脱饱和的作用。本研究采
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花生四烯酸（ARA）是由亚油酸和亚麻酸等经过脱氢和碳链延长的反应合成，而此过程中△5脂肪酸脱氢酶可催化此反应，作为ARA合成途径中的限速酶，在反应中起到了脱饱和的作用。本研究采用pBR322作为克隆载体，以提取的深黄被孢霉基因组总的RNA为模版通过反转录和重组克隆获得△5脂肪酸脱氢酶基因，再以pGAPZαA作为表达载体将△5脂肪酸脱氢酶基因转入巴斯德毕赤酵母SMD1168中进行表达，并验证检验其对二高-γ亚麻酸底物的转化率水平。为后续开展脂肪酸脱氢酶功能性表达及新型菌株构建研究奠定理论基础。本研究通过克隆获得的基因片段长度为1364bp，通过NCBI-Blast在线对比可知，此克隆片段不仅与已公布的深黄被孢霉的△5脱氢酶基因(AF067654)的同源性很高，而且同样具有完整开放阅读框（1341bp），可编码446个氨基酸。在序列中还存在脂肪酸脱氢酶特有的3个极保守的组氨酸簇，以上结果证明了克隆获得的基因片段为△5脂肪酸脱氢酶基因。采用电击转化法诱导构建带有△5脂肪酸脱氢酶基因重组酵母工程菌株，表达产物经SDS-PAGE电泳和Western bloting鉴定分析，分子量在50kDa左右，且具有生物活性。通过发酵验证试验，采用GC对重组酵母工程菌株发酵液进行脂肪酸的分析，该工程菌株具备生产花生四烯酸的能力，发酵液中花生四烯酸占总脂肪酸含量的9.53%，且对底物二高γ-亚麻酸转化率达到了51.7%。
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