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松花粉含有丰富的营养成分,是一种营养密度高、保健功能全面的保健品。松花粉具有提高机体免疫和抑制肿瘤等功效,是目前研究的热点。国内外学者普遍认为多糖是花粉中主要的功效因子。因此本文对松花粉多糖的脉冲超声辅助提取技术、分离纯化技术及其体外抑瘤效果进行了研究,初步探索松花粉的活性机理,对推动松花粉的精加工和科学研究提供了科学依据,具有积极的意义。主要研究内容如下:
(1)通过对松花粉破壁前后主要营养成分的分析比较,得出松花粉是一种营养物质含量丰富的天然原料,破壁处理后有利于松花粉营养成分的提出。采用超临界CO2萃取技术对花粉进行脱脂。
(2)利用超声辅助的方法对松花粉多糖进行提取,为防止超声脉冲法对松花粉多糖的降解,研究了超声提取时间、提取温度、料液pH值等对松花粉多糖降解的影响,在此基础上通过单因素和正交试验,确定超声辅助提取松花粉多糖的最佳工艺条件:超声功率1000W、提取时间3次(每次20min)、提取温度40℃、pH8、超声发出时间2s、超声间歇时间1s。提取得率为88.26%。
(3)比较分析了盐酸法、三氯乙酸法和sevag法三种脱蛋白方法对松花粉水提液蛋白的脱除影响,得出三氯乙酸法的效果最佳,提取液4℃,pH值为3时,蛋白脱除率达到87.56%。
(4)使用DEAE-52纤维素和葡聚糖凝胶G-200层析柱,对脱蛋白后的松花粉多糖PPPS进行了进一步的纯化,得到PPPS1、PPPS2和PPPS3三个单一多糖组分,纯度分别为97.81%、94.75%和95.32%。
(5)采用四氮唑盐法(MTT法),研究了松花粉多糖对95D(猪肺癌细胞株),SGC-7901(人胃癌肿瘤细胞)的体外抑瘤作用,结果初步表明,在体外松花粉多糖对这两种肿瘤细胞的抑制率很小,没有抗肿瘤活性。推测出两个假设结论:一、多糖不是松花粉中免疫调节和抗肿瘤活性的主要功能因子。二、松花粉多糖的免疫调节和抗肿瘤活性主要是通过在机体内免疫调节作用、增强免疫功能,达到抑制和杀灭肿瘤细胞的。