根癌农杆菌C58趋化受体编码基因atu0514和atu2173功能的鉴定

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细菌对植物根系分泌物中的营养物质具有趋化性,这使细菌在植物根际间聚集进而与植物根系组织产生互作关系。因此,细菌趋化性被认为是细菌与植物互作关系建立的一个重要前奏。根癌农杆菌在土壤中既可以在根际间定殖,也可以做为植物病原菌侵染植物的根系组织。趋化受体(也称为甲基接受趋化蛋白,MCP)是细菌趋化信号通路中的主要信号蛋白。MCP特异性感知并结合化学效应因子,并将感应到的信号传递给趋化信号系统下游的蛋白。根癌农杆菌C58的基因组预测,总共有20个基因可以编码MCP,但对这20个趋化受体基因的功能鲜有报道。因此,通过对根癌农杆菌趋化受体功能的研究,我们可以对根癌农杆菌趋化信号机制有更深入的了解。atu0514是唯一位于根癌农杆菌C58 che操纵子内的趋化受体基因,鉴定atu0514编码的趋化受体(此处称为MCP514)的功能可以更好地了解根癌农杆菌趋化信号传递机制。趋化表型实验的结果表明,atu0514的缺失显著地削弱了根癌农杆菌对蔗糖、缬氨酸、柠檬酸和乙酰丁香酮(AS)四种不同化学物质的趋化响应。随后一系列EGFP-MCP514融合蛋白荧光亚细胞定位的实验结果表明,MCP514通过其发卡亚结构域与其他跨膜趋化受体发卡亚结构域间的互作实现在细胞端点的定位。MCP514发卡亚结构域多个位点的点突变游动平板实验结果表明,MCP514的N336和V353位点的突变会影响根癌农杆菌C58的趋化性,说明MCP514通过与其他趋化受体的互作的方式参与到根癌农杆菌C58对多种物质趋化的信号转导过程。atu2173是位于根癌农杆菌C58环状染色体上的一个趋化受体基因,它编码一种带有dCache1配体结合域的趋化受体MCP2173。通过差示荧光扫描法(DSF),在体外筛选出了 17种可以与MCP2173结合的氨基酸配体。体内毛细管趋化实验结果表明,atu2173的缺失会不同程度的影响根癌农杆菌C58对这17种氨基酸的趋化响应,说明MCP2173是根癌农杆菌中主要的氨基酸趋化受体。通过观察MCP2173配体结合结构域内保守氨基酸位点点突变株的趋化表型,发现R127、Y145、D147和D174这四个位点的突变会使MCP2173丧失了对氨基酸的趋化性,说明R127、Y145、D147和D174这四个位点是根癌农杆菌C58识别氨基酸的关键位点。生物被膜结晶紫染色实验结果表明MCP2173的缺失削弱了根癌农杆菌C58生物被膜的形成量,说明趋化受体MCP2173参与了根癌农杆菌C58生物被膜的形成过程。综上所述,MCP514通过与其他趋化受体的互作影响根癌农杆菌C58对不同物质的趋化性,而MCP2173是根癌农杆菌C58主要的氨基酸趋化受体并参与生物被膜的形成。本研究的结果将促进我们对根癌农杆菌趋化性的分子机制和生理功能有更好的了解,为进一步更好的改造利用根癌农杆菌提供帮助。
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