背景和目的克罗恩病（Crohn’s disease,CD）是一种病因未明的慢性非特异性胃肠道炎症性疾病。近年来CD发病率呈逐步增加趋向,因其易反复发作,治疗花费巨大,给患者、家庭和社会带来沉重负担。最近的研究发现小肠上皮细胞G1期阻滞在CD的发病中具有重要意义。但是,调控这种细胞周期阻滞的机制仍然不清楚。氧化应激是细胞发生G1期阻滞的原因之一。在氧化应激发生过程中,CD患者体内积累了大量的晚期氧化蛋白产物（Advanced oxidation protein products,AOPPs）。因此,本研究旨在阐明AOPPs在调节小肠上皮细胞G1期阻滞中所起的作用及其分子机制,为CD的发生发展提供新的理论基础,也为CD的防治提供新干预靶点。方法1.应用流式细胞术分析来自CD病变和正常对照小肠组织的原代小肠上皮细胞周期的分布。2.通过氯胺T法检测CD患者和志愿者血浆中的绝对AOPPs水平,并通过去除血浆白蛋白含量的差异计算得出相对AOPPs浓度;采用免疫组化染色检测小肠组织中cyclin E、CDK2和p27kip1的表达情况,并统计分析它们的表达量与CD患者相对AOPPs浓度的相关性。3.利用体外制备的AOPPs处理培养的永生化大鼠小肠上皮细胞（IEC-6）,观察细胞周期分布情况、细胞周期蛋白和CDK的变化。4.采用免疫荧光、免疫共沉淀、Western blotting和Real-time PCR等方法检测AOPPs刺激后的IEC-6细胞中RAGE、CD36、MAPK和p27kip1信号通路的变化。5.分别利用RAGE、CD36、p27kip1特异性siRNA和MAPK抑制剂从不同层面阻断信号通路,再给予AOPPs刺激IEC-6细胞,用流式检测细胞周期变化以及Western blotting等方法检测相关蛋白表达变化。6.运用急性AOPPs腹腔注射的正常C57BL/6小鼠模型评价AOPPs的体内效应。结果1.活动期CD患者病变小肠上皮细胞处于G1期的细胞比例明显增加;且活动期CD患者血浆相对AOPPs浓度升高,并与CD小肠组织中cyclin E和CDK2的低表达呈负相关,与p27kip1的高表达呈正相关。2.体内外AOPPs处理均可增加小肠上皮细胞处于G1期的细胞比例,并显著降低小肠上皮细胞cyclin E和CDK2的表达。3.AOPPs上调RAGE和CD36的表达,并增加其与两种细胞膜受体的相互作用,继而磷酸化下游的JNK信号,进一步增加p27kip1的表达以及p27kip1与cyclin E-CDK2复合物的结合,从而影响细胞周期进程。4.RAGE、CD36、p27kip1特异性siRNA和JNK抑制剂可以逆转AOPPs诱导的RAGE/CD36-JNK-p27kip1信号级联反应。结论1.AOPPs在CD患者体内的蓄积与小肠上皮细胞G1期阻滞的发生具有相关性。2.AOPPs以浓度和时间依赖性的方式介导小肠上皮细胞G1期阻滞的发生。3.AOPPs通过RAGE和CD36,激活下游JNK信号和p27kip1,最终诱导小肠上皮细胞G1期阻滞的发生。4.AOPPs能在体内介导小肠上皮细胞发生G1期阻滞,并且激活小肠组织中的 RAGE/CD36-JNK-p27kip1 信号通路,RAGE、CD36 和 p27kip1 的特异性siRNA均可以逆转AOPPs诱导的小肠上皮细胞G1期阻滞。