【摘 要】
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人参皂苷Rg3,属于二醇类皂苷,能阻碍肿瘤细胞的生长、扩散和转移的作用,具有很高的生理活性与药用价值。本论文主要研究了利用微生物酶转化法将一般参制品中含量较高的二醇皂
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人参皂苷Rg3,属于二醇类皂苷,能阻碍肿瘤细胞的生长、扩散和转移的作用,具有很高的生理活性与药用价值。本论文主要研究了利用微生物酶转化法将一般参制品中含量较高的二醇皂苷转化为人参皂苷Rg3,并进行Rg3粗产品的分离提纯。本实验先从人参中利用水饱和正丁醇超声萃取出人参皂苷,然后用比色法和高效液相色谱法鉴定和分析了几种含量较高的人参皂苷,结果显示,人参皂苷Rb1、Rb2、Rc、 Rd、Re、Rf、Rg1这七种人参皂苷在参制品中含量最高,共含总皂苷含量90%以上。红参中的皂苷种类和含量比白参多,在同一种类人参中芦头里皂苷种类和含量比主根多。为得到合适的将人参二醇类皂苷转化为Rg3的特种人参皂苷糖苷酶,本实验对真菌sp.848、四种在同一批次人参土壤中筛选出的细菌、新筛选菌种Phycicoccus ginsenosidimutans BXN5-13T菌、以及一种细菌的大肠杆菌转基因工程菌进行了发酵培养,采用TLC酶活力检测法在培养条件方面进行了研究,确定新菌种sp.BXN5-13T菌的发酵条件为:30℃;Ⅲ号培养基;浓度为0.01%人参茎叶总皂苷为酶的诱导物;发酵时间为48h,并综合培养时间、温度等因素,最终选用sp.18菌的基因工程菌作为代表进行酶的研究,采用DEAE阴离子交换的蛋白分离方法对粗酶液进行分离,用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳对分离的酶进行检测,并初步分离出纯酶,其分子量约为70.1KD。将提取后的纯酶作用于人参二醇皂苷(PPD),初步确定酶反应的条件。实验还着力于酶转化法得到的人参皂苷Rg3粗产品的提纯。实验采用AB—8大孔吸附树脂吸附分离Rg3,从而达到脱糖、去无机离子,再通过硅胶柱精细分离,进一步提纯,得到高纯度的产品。50g酶转法得到的Rg3粗品稀有皂苷经过AB—8大孔吸附树脂吸附分离和硅胶柱进一步提纯分别得到较纯Rg3产品8.1542g,Rg3和Rd混合产品13.18g,及其它未知产品。其Rg3的总含量为87.89%,其中含20-(S)Rg321.02%,含20-(R)Rg366.87%。
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