白塞病(Behcet’s disease, BD)是一种可能与遗传因素、环境微生物感染、以及其他病人生活环境因素等相关的系统性自身免疫性疾病。目前已有证据表明该疾病在相对高发的亚洲人群中具有一些特殊遗传位点,但与环境微生物感染方面的相关性仍需要更多的实验证据。本课题采用五种人源细胞系对BD患者的血清自身抗体谱进行测定,通过分析不同细胞免疫荧光强度的差异,选取人脐静脉内皮细胞(HUVEC)为可用于特异性抗原分子筛选的靶细胞。然后分别采用一维分离技术(免疫印迹和免疫沉淀)和二维分离技术(双向电泳联合个体全蛋白质组生物芯片)对HUVEC细胞裂解液中的能够与BD患者血清抗体特异性识别的靶蛋白进行筛选。实验结果表明,在本课题构建的一维和二维实验体系中,分别成功筛选出一个新的疾病相关自身抗原。经过MALDI-TOF/TOF质谱进行序列鉴定,确定其分别为抗增殖蛋白Prohibitin和微管蛋白β-tubulin。然后,通过分子克隆和发酵表达,分别获得大量纯化的重组蛋白。接着制备对应的酶免检测试剂盒,进行临床验证和疾病症状关联性分析。结果表明,抗Prohibitin抗体和抗β-tubulin抗体在我国汉族BD患者的血清水平均较健康组有显著性差异(p<0.0001)。本课题首次在我国汉族BD患者血清中发现抗Prohibitin抗体和抗β-tubulin抗体的存在,且上述两种新发现自身抗体所对应的抗原与微生物热激蛋白HSP65相关；提示病菌感染、病人的生活环境等的确都可能参与BD发病进程,为该疾病的发病机制和分子诊断研究提供了一定有益信息。