【摘 要】
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本研究通过卡那霉素抗性筛选共得到30株转珠美海棠Mz2NHX1基因拟南芥T1代阳性苗,通过PCR、RT-PCR检测,均能扩增得到1635kb左右的条带,与目的基因片段的大小相符,对T1代种子继
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本研究通过卡那霉素抗性筛选共得到30株转珠美海棠Mz2NHX1基因拟南芥T1代阳性苗,通过PCR、RT-PCR检测,均能扩增得到1635kb左右的条带,与目的基因片段的大小相符,对T1代种子继续进行kan抗性筛选,其中9个株系分离比例约为3:1,对其进行PCR、RT-PCR检测,结果呈阳性,单株收种记为T2代种子。对T2代种子继续kan抗性筛选,最终有4个株系不再发生分离现象,说明已成功获得携带Mz2NHX1基因的拟南芥纯合株系。对其进行GUS染色分析,发现Mz2NHX1基因在拟南芥叶片和根部均有表达。随着盐胁迫和干旱胁迫的加重,野生型和转基因拟南芥SOD活性呈先提高后降低趋势,二者SOD活性在100mmol·L-11 NaCl和10%PEG处理下增加到最大值,在重度胁迫下野生型拟南芥SOD活性的下降幅度大于转基因型;野生型和转基因拟南芥POD活性在轻度胁迫下变化不明显,在300mmol·L-1NaCl和30%PEG-6000处理下,转基因植株的POD活性是野生型的1.55倍和2.16倍;野生型和转基因拟南芥MDA含量和电导率都随着胁迫程度的加重呈上升趋势,野生型拟南芥的上升幅度高于转基因型;野生型和转基因拟南芥脯氨酸含量随胁迫程度的加重呈不断上升趋势;叶绿素和类胡萝卜素含量先上升后下降;转基因拟南芥可溶性蛋白含量先升高后降低,野生型整体呈下降趋势;野生型和转基因拟南芥可溶性糖含量随着盐浓度的增加不断上升,干旱胁迫下呈先增加后降低趋势,在各个处理下,转基因拟南芥可溶性蛋白和可溶性糖含量均高于野生型。以上结果表明在盐胁迫和干旱胁迫下,转基因植株的各项生理指标均强于野生型,说明Mz2NHX1基因的过量表达,可以让转基因拟南芥更好的适应逆境胁迫,提高了植株的耐盐性和耐旱性。通过实时荧光定量PCR分析了不同浓度和不同时间NaCl、PEG-6000胁迫下转基因拟南芥中Mz2NHX1基因的表达情况,结果显示一定范围的盐胁迫和干旱胁迫会诱导基因表达量增加,从而提高了Mz2NHX1蛋白的转运活性,将过量Na+运输至液泡内,减轻了Na+对细胞的毒害,同时降低了细胞水势,提高了细胞吸水能力,证明Mz2NHX1基因与植物的耐盐性、耐旱性密切相关。
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