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卵巢癌是全球最常见的恶性肿瘤之一。大约70%的病例被确诊时已是晚期。缺乏早期有效的筛查方法及典型的临床症状是延误卵巢癌诊断的最主要原因。而卵巢癌的高死亡率归咎于其远处转移的特性。因此,现在迫切地需要寻找到更可靠的肿瘤标志物用于早期诊断及靶向治疗。FAM83D(The family with sequence similarity 83,member D)位于染色体20q上,含有高度保守的结构域(DUF1669),在有丝分裂期间定位于纺锤体以调节纺锤体和维持细胞分裂。FAM83D在多种癌症中高度表达,但其在卵巢癌中的意义却不明确。本课题将探讨FAM83D在卵巢癌中的作用及可能的分子机制。第一部分FAM83D在卵巢癌中的表达情况目的:探究FAM83D在卵巢癌组织中的表达情况,并分析其表达水平和临床病理特征之间的相关性。方法:通过免疫组织化学染色方法对组织芯片染色,观察并记录FAM83D在组织中的表达情况,并统计分析FAM83D的表达与临床病理特征的相关性。结果:FAM83D主要定位于细胞浆。与正常卵巢组织相比,卵巢癌组织中FAM83D的表达明显上调。与早期卵巢癌(I,II期)相比,FAM83D在晚期(III,IV)中的表达更高(P<0.05)。FAM83D的表达水平与年龄或肿瘤分级之间未发现显著的相关性。结论:FAM83D在卵巢癌组织中高表达。FAM83D的表达与卵巢癌分期相关,分期越高,其表达也越高。第二部分FAM83D对卵巢癌细胞的恶性生物学行为的影响目的:探究在沉默和过表达FAM83D后,卵巢癌细胞SKOV3和A2780的自噬、增殖和侵袭能力所发生的变化。方法:(1)通过RT-PCR检测不同卵巢癌细胞株中FAM83D的m RNA基础表达量;慢病毒对卵巢癌细胞进行转染,构建沉默和过表达的稳转细胞株,并通过WB检测转染效率;(2)WB和RFP-GFP串联荧光标记LC3检测FAM83D对卵巢癌细胞自噬的影响;(3)Edu实验检测FAM83D对卵巢癌细胞增殖能力的影响;(4)Transwell实验检测FAM83D对卵巢癌细胞侵袭能力的影响;(5)裸鼠皮下成瘤模型检测FAM83D对卵巢癌细胞裸鼠体内成瘤能力的影响。结果:(1)在SKOV3细胞中FAM83D的表达量相对较高,而A2780细胞中FAM83D的表达量相对较低;在SKOV3细胞中,设置为沉默组LVRU6P-FAM83D-01、LVRU6P-FAM83D-02和对照组LVRU6P-FAM83D-NC,在A2780细胞中,设置过表达组LV121-FAM83D和对照组LV121-NC;沉默组LVRU6P-FAM83D-01和LVRU6P-FAM83D-02中的FAM83D蛋白表达低于对照组LVRU6P-FAM83D-NC,而过表达组LV121-FAM83D中的FAM83D蛋白表达高于对照组LV121-NC。(2)在沉默组LVRU6P-FAM83D-01和LVRU6P-FAM83D-02中,LC3II蛋白显著上调,在过表达组LV121-FAM83D中,LC3II蛋白表达下降;FAM83D的沉默组中,红色荧光数目显著多于对照组,FAM83D过表达的LV121-FAM83D组中,红色荧光的数量显著减少。(3)在沉默组LVRU6P-FAM83D-01和LVRU6P-FAM83D-02中,细胞的阳性率显著低于对照组;而在过表达组LV121-FAM83D中,细胞的阳性率显著高于对照组。(4)在沉默组LVRU6P-FAM83D-01和LVRU6P-FAM83D-02中,穿过的细胞数量显著少于对照组;而在过表达组LV121-FAM83D中,穿过的细胞数量显著多于对照组。(5)沉默组LVRU6P-FAM83D-01和对照组LVRU6P-FAM83D-NC相比,沉默组皮下瘤的重量和体积均小于对照组;过表达组LV121-FAM83D和对照组LV121-NC相比,其皮下瘤的重量和体积均大于对照组。结论:体外实验表明,沉默FAM83D后,SKOV3细胞的自噬水平升高,增殖和侵袭能力下降,过表达FAM83D后,A2780细胞的自噬水平下降,增殖和侵袭能力增强;在体内,沉默FAM83D后,抑制了SKOV3细胞在裸鼠体内成瘤能力,而过表达FAM83D后,A2780细胞在裸鼠体内成瘤能力增强。第三部分FAM83D促进卵巢癌细胞的恶性生物学行为的机制研究目的:探究FAM83D促进卵巢癌细胞的恶性生物学行为的潜在机制方法:(1)WB检测PI3K/AKT/m TOR通路蛋白的表达水平;(2)免疫组化检测FAM83D、p-AKT和p-m TOR在裸鼠瘤体内的表达;(3)WB、Edu和Transwell分别检测m TOR抑制剂Torin1是否能逆转FAM83D对卵巢癌A2780细胞自噬、增殖和侵袭能力的影响。结果:(1)LVRU6P-FAM83D-01和LVRU6P-FAM83D-02组中PI3K、p-AKT、p-m TOR的蛋白表达水平低于LVRU6P-FAM83D-NC组,LV121-FAM83D组中PI3K、p-AKT、p-m TOR的蛋白表达高于LV121-NC组;(2)在裸鼠瘤体中,LVRU6P-FAM83D-01组中FAM83D、p-AKT、p-m TOR的表达低于LVRU6P-FAM83D-NC组;LV121-FAM83D组的FAM83D、p-AKT和p-m TOR的表达均较LV121-NC组增强。(3)在加入m TOR抑制剂Torin1后,LV121-FAM83D+Torin1组LC3II表达水平高于LV121-FAM83D组,而LV121-FAM83D+Torin1组细胞增殖的阳性率以及细胞的穿过数量均少于LV121-FAM83D组。结论:FAM83D通过PI3K/AKT/m TOR信号通路影响卵巢癌细胞的恶性生物学行为。阻断m TOR后,能够逆转FAM83D对卵巢癌细胞自噬、增殖、侵袭的影响。