杨树湿心材病原分离鉴定以及内生拮抗菌筛选

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杨树(Populus spp.)是短周期工业用材林和的四旁绿化的重要树种之一,具有生长速度快、分布广、繁殖快、适应能力强的优点,对解决用材和生态问题起着重要作用。然而,杨树中普遍存在的湿心材现象给杨树栽培带来了很大的难题,对杨树的发展造成威胁。湿心材作为一种世界性的树木茎干病害,能够危害多个树种,在我国杨树中尤其严重。为了明确杨树湿心材为害的致病菌及其侵染途径,从而科学防治杨树湿心材,本文从湖北省石首杨树研究基地不同杨树品种的无性系中采集湿心材发病组织,从中分离、纯化优势菌株,并分别通过茎部注射法回接到杨树实生苗测定菌株致病性,在明确致病菌的基础上,综合形态特征、生理生化分析、16S r RNA基因序列以及多基因序列分析(MLSA)对具有显著致病症状的12-1号致病菌进行分类鉴定。另外,从杨树茎干内筛选出对湿心材病原菌有拮抗作用的内生拮细菌。通过上述研究,主要结果如下:(1)通过对石首7种杨树无性系调查取样发现,不同程度的杨树湿心材发生率达100%。在用生长锥钻取发病树木心材时,发现有黄绿色的树液从钻孔处流出,同时散发出有恶臭的气体。测得湿心材p H呈弱碱性(7.5-8.0)。采集到的湿心材发病轻者,树心材呈水渍状,发病稍重者,出现红褐色症状,严重发病者树木髓心部伴有腐烂变黑呈絮状现象。(2)通过组织分离法从湖北石首采到的杨树湿心材样品中分离纯化得到10个菌株,10种菌皆为杆状或棒状,除3-6外,其余9种菌皆为革兰氏阴性菌,主要有果胶杆菌属4种,肠杆菌属2种,假单胞菌属、寡单胞杆菌属、芽孢杆菌属和布赫纳氏菌株各1种。通过温室接种,进行致病性测定,筛选并确定编号为12-1是导致该病害的主要病原菌之一。通过形态学、生理生化特征及分子生物学技术检测,鉴定引起杨树湿心材的该病原菌为柳欧文氏菌Brenneria salicis。采用组织分离法对杨树湿心材病轻株心材组织进行分离,获得待测拮抗内生细菌。(3)通过平板对峙初筛以及温室盆栽复筛,从中筛选出一株对杨树湿心材病菌有拮抗作用的内生细菌。结合形态观察、生理生化特征和16S r RNA序列分析,鉴定该拮抗菌株为类芽孢杆菌Paenibacillus taiwanensis。杨树湿心材致病菌的鉴定,为今杨树后湿心材的发生规律的研究、抗性育种以及防治措施的制定提供参考依据。筛选出对杨树湿心材病菌有拮抗作用的生防菌株,为利用拮抗微生物防治杨树湿心材提供了科学的理论和实践依据。
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