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研究目的:研究复方沙太合剂(Fufang Shatai Heji,STHJ)对环磷酰胺诱导的免疫低下和类风湿性关节炎引起的免疫紊乱这两种免疫状态的调节作用,并深入探讨其作用机制。研究内容:本研究主要研究(1)通过腹腔注射环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)来建立免疫低下小鼠模型,研究STHJ对免疫低下小鼠的免疫调节作用;(2)在两种品系小鼠身上建立不同的类风湿性关节炎模型,并挑选最合适的模型;(3)在DBA/1小鼠背景下建立胶原诱导性关节炎,通过灌胃法给予STHJ后观察其对小鼠关节的保护作用。研究方法:(1)以Balb/c小鼠为研究对象,通过腹腔注射CTX来建立免疫低下模型。模型建立成功后开始通过灌胃法连续给予STHJ 30天。给药结束后,通过眼球摘除法处死小鼠并收集全血和脾脏。对全血进行离心后获得血清,并通过ELISA法测量血清中TNF-α,IL-2,IL-6等炎性因子的表达水平。对脾脏进行研磨等操作以获得脾淋巴细胞,并通过流式技术分析相关淋巴细胞亚群的百分含量。(2)以DBA/1和C57BL/6小鼠为研究对象,通过免疫接种的方法来诱导类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)模型。在本实验中,我们主要是研究胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)和抗原诱导的关节炎(antigen-induced arthritis,AIA)在不同种属中的造模成功情况。通过分析比较,确定合适的造模方法来研究STHJ对RA的保护作用。(3)以DBA/1小鼠为研究对象,通过免疫接种的方法建立CIA模型。在第二次加强免疫后开始连续灌胃给予STHJ 30天,并定期监测小鼠体重和足爪肿胀情况。给药结束后,通过眼球摘除法取血,并收集脾脏、腿和股骨头。对关节进行组织病理学分析以评价STHJ对关节破坏的保护作用。对股骨头进行RT-PCR技术检测,以分析STHJ给药后软骨中相关基因表达的变化。对脾脏结构变化和血清中相关炎性因子的表达进行分析,以了解STHJ对CIA小鼠免疫状态的影响。研究结果:(1)在CTX诱导的免疫抑制小鼠给予STHJ治疗后,可以显著提高胸腺和脾脏指数。通过对脾淋巴细胞分析发现,STHJ治疗后可增加B细胞和自然杀伤细胞(natural killer cells,NK)活性,降低CD8+T、CD8+CD122+T、自然杀伤T细胞(natural killer T cells,NKT)和γδT细胞活性。此外,STHJ还可以上调CTX诱导的免疫抑制小鼠血清中IL-2,IL-6和TNF-α的表达,下调IL-10的表达。(2)通过对以DBA/1和C57BL/6小鼠为背景的RA造模情况分析发现,在DBA/1背景下的造模成功情况要明显好于C57BL/6。在DBA/1背景下造模,小鼠CIA造模成功率高且维持时间长。在C57BL/6背景下造模,小鼠CIA造模成功率低,AIA造模成功率高但维持时间短。(3)在CIA模型小鼠给予STHJ治疗后,关节肿胀情况明显减轻。关节组织病理学分析也发现,STHJ治疗后可减轻滑膜增生和软骨破坏。对小鼠软骨进行免疫组化分析发现,STHJ治疗的小鼠软骨中MMP-9、MMP-13和ADAMTS-5的表达明显降低。对软骨进行RT-PCR技术分析也发现,STHJ治疗后的小鼠软骨中MMP-9、ADAMTS-4、ADAMTS-5、TIMP-1、Type X collagen的mRNA表达显著降低,而aggrecan的mRNA表达明显升高。STHJ治疗后,脾脏的结构变形趋势也有改善的现象,且红髓增殖情况得到控制,脾脏包围的纤维囊也有变厚,也无明显的铁血色颗粒物的出现。此外,CIA小鼠血清中高表达的IL-17a也得到有效地抑制。研究结论:以上结果表明,STHJ可以通过调节相关淋巴细胞和炎症因子的表达有效地改善了CTX诱导的免疫抑制。在CIA模型小鼠中,通过给予STHJ治疗后,可显著改善关节炎症状和机体免疫状态,并对软骨破坏具有一定的保护作用。因此,STHJ在免疫低下和免疫紊乱中都有调节免疫的功能。