背景：膀胱癌是泌尿生殖系统常见肿瘤之一，在西方发达国家中其发病率占男性恶性肿瘤的第4位，女性第9位。在我国居泌尿生殖系统恶性肿瘤发病第1位，并且有逐年增长的趋势。手术切除结合膀胱灌注治疗是临床上治疗浅表性膀胱癌的主要手段，但仍有40%－80%的复发率。化疗耐药是复发的主要原因之一，对于化疗耐药的机制目前并不明确。因此，我们通过构建了膀胱移行细胞癌T24的耐药株，并对其生物学特性进行分析，从而研究其形成机制。实验设计:采用丝裂霉素C（MMC）浓度梯度持续递增法诱导建立膀胱癌T24耐药株；使用高倍显微镜观察细胞的形态；采用MTT法检测耐药株与亲本细胞的增殖活性及生长能力；采用平板克隆形成试验检测耐药株与亲本T24细胞的单细胞集落形成能力；采用Transwell迁移、侵袭实验检测耐药株与亲本T24细胞的迁移和侵袭能力；采用无血清悬浮培养法检测耐药株与亲本T24细胞的成球能力及肿瘤干细胞的富集情况。结果:1.使用初始浓度为10μg/mL丝裂霉素持续增量诱导，历时4个月，直到细胞能在0.2mg/mL的RPMI1640培养基中稳定、良好生长，并能持续传代，形成膀胱癌T24耐药细胞株。2.在MTT试验中，撤药后T24/MMC的生长更加迅猛，生长能力较亲代细胞增强。通过平板克隆试验、Transwell迁移、侵袭实验中发现T24/MMC细胞与亲代细胞相比，克隆形成能力、迁移和侵袭能力均增加，说明耐药株T24/MMC恶性程度更高。3.在无血清成球培养试验中，T24/MMC细胞在第三天就开始明显成球，与亲代细胞相比，成球时间更短，成球率更高，球囊更紧密，体积也更大，说明T24/MMC细胞中富集了癌干细胞。结论:低浓度丝裂霉素持续增量法可诱导形成膀胱癌T24耐药细胞株，且耐药株T24/MMC恶性程度更高，癌干细胞被富集。