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莲子心(Nelumbinis plumula)是睡莲科植物莲种子的绿色胚根,具有广谱、高效及无毒副作用的特点,其多种生物活性成分被证实有清心安神、止咳化痰、抗炎、抗氧化、抗肿瘤、降血压和降血糖等功效,是我国天然药用资源中的重要宝藏。但目前为止,莲子心中重要的有效成分酚类物质的化学结构和药理作用尚有待进一步的挖掘和创新。在我国,胰腺癌的发病率逐年上升,且呈现快速化和年轻化的趋势。胰腺癌极易转移而危及到其他器官,对患者健康造成很大的威胁。在现有的治疗条件下,抗胰腺癌的药物副作用较大。研究表明,植物多酚具有较好的抗氧化和抗肿瘤作用,经过专家学者的不断尝试,使用天然多酚与抗癌药物结合进行治疗已成为可能,且能降低药物对人体的副作用,同时彼此之间还能产生协同作用。因此,鉴定莲子心酚类提取物中的主要组分,挑选出具有抗癌功效的组分,研究各组分的抗癌作用与分子机制,对探索将莲子心酚类提取物应用于辅助癌症治疗具有重要的指导意义。本论文以莲子心酚类物质为研究对象,对比分析莲子心酚类物质不同提取方法的效率,明确莲子心酚类物质的体外抗氧化水平,探索莲子心酚类物质抗氧化与抗癌之间的关系;通过细胞学实验明确莲子心酚类物质及其主要组分对胰腺癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的调控作用及抗氧化作用;利用WB技术和转录组学技术探究莲子心酚类物质及其主要组分调节胰腺癌细胞生物学功能的作用机理,为莲子心的应用推广及胰腺癌的辅助治疗提供新的理论基础。研究结果如下:1、从莲子心中提取酚类物质,并纯化,分析其对DPPH自由基和羟自由基的清除能力,以及总抗氧化能力。通过与没食子酸标准曲线对照,结果显示,蒸馏水提取法对莲子心多酚的提取效果最好,其次为乙醇加热回流提取。萃取剂正丁醇相中的得率最高(12.49%),是乙酸乙酯相(6.58%)和正己烷相(5.23%)的2倍左右,水相最低(4.69%)。4.37μg正丁醇相的多酚对DPPH自由基的抑制率可达70.89%,相当于5μg茶多酚对DPPH自由基的清除效率。同时,1.80μg的正丁醇相多酚或0.50μg的水相多酚对羟自由基的清除效果与0.35 mg的茶多酚相当。正丁醇相和水相的总抗氧化能力随着样品浓度的不断上升,分别在4 mg/m L和6 mg/m L的浓度时开始达到最大抗氧化效果。利用液相色谱-质谱(LC-MS)和气相色谱-质谱(GC-MS)技术,对莲子心总酚类纯化物进行定性和定量分析。利用人工模拟消化技术和LC-MS技术,分析莲子心总酚类纯化物在口、胃、肠消化液中的消化程度。LC-MS和GC-MS分析到莲子心多酚正丁醇相、水相、乙酸乙酯相和正己烷相中含有牡荆素、芹菜苷和野漆树苷三种多酚物质。这三种物质经过口、胃、肠的人工模拟消化液中的消化率分别为唾液(72.31%、76.72%和81.41%);胃液(47.29%、14.18%和36.41%)和胰液(19.30%、22.69%和37.91%)。2、利用MTS、TUNEL和Transwell等分析莲子心总酚类纯化物及其主要酚类组分对胰腺癌细胞株细胞活力、凋亡、迁移和侵袭的调控作用。ROS检测莲子心总酚类纯化物及其主要多酚组分对胰腺癌细胞株的抗氧化作用。MTS检测发现莲子心总酚类纯化物(100μg/m L)处理对胰腺癌细胞株PANC-1和ASPC-1的活力有显著的抑制作用,但对Capan-2和SW1990没有显著性的抑制效果。莲子心总酚类纯化物(100 ug/m L)处理PANC-1和ASPC-1细胞后,细胞凋亡水平显著增加、ROS水平显著减少。莲子心三种多酚单体对PANC-1和ASPC-1细胞增殖均有显著的抑制作用,其中,野漆树苷的抑制作用最强。经野漆树苷(100μg/m L)处理后,PANC-1和ASPC细胞的凋亡显著增加、ROS显著减少、细胞迁移和侵袭能力显著减弱。3、采用WB技术研究莲子心酚类物质及其主要组分对胰腺癌细胞株AKT/JNK通路、自噬通路和内质网应激通路关键蛋白的激活或表达水平。利用高通量转录组测序分析莲子心及其主要组分对胰腺癌细胞株基因网络的表达调控作用。WB检测发现经莲子心总酚纯化物处理后,胰腺癌细胞PANC-1和ASPC-1中p-AKT表达显著减少和JNK(p-JNK)表达显著增多。野漆树苷处理后的胰腺癌细胞PANC-1和ASPC-1中,p-AKT表达显著减少,NK(p-JNK)表达没有显著变化。同时,PANC-1胰腺癌细胞经莲子心总酚类纯化物和野漆树苷处理后LC3-I表达均显著减少,LC3-II表达均显著增加。且,野漆树苷处理PANC-1、ASPC-1均能诱导内质网应激相关蛋白ATF-6、p-EIF2A、XBP-1的表达,内质网应激抑制剂4-PBA预处理能抑制野漆树苷诱导的细胞凋亡。转录组测序显示莲子心总酚纯化物处理前后的差异表达基因有8000多个,野漆树苷处理前后的差异基因有381个,其中莲子心总酚纯化物和野漆树苷处理前后共同差异的表达基因有165个。而莲子心总酚纯化物、野漆树苷和紫杉醇处理前后共同差异表达的基因有54个。莲子心总酚纯化物与野漆树苷处理前后的差异基因在m TOR通路和Metabolic pathways具有显著富集。同时,揭示莲子心总酚纯化物及其主要活性组分抗癌的分子机理。