利用EMS诱变紫粒小麦创制小麦新种质

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小麦(Triticum aestivum L.)是世界三大粮食作物之一,是重要的口粮作物,小麦的产量和品质关系到国家的粮食安全和人民生活质量的提高。优异的种质资源在小麦育种中起着决定性作用。种子是农业的“芯片”。利用物理或化学方法进行人工诱变,经过筛选和鉴定,可以获得满足人民需求的优异小麦新种质。EMS诱变具有诱变效率高、范围广以及对染色体损伤小等优点,且有效省时,因此被广泛应用于农作物的诱变育种。EMS诱变创制的饱和突变体库是增加种质资源的一个重要手段,同时也促进了基因功能的鉴定。EMS诱变主要产生点突变,主要造成G/C到A/T的转换。TILLING技术和ARMS-PCR技术是筛选点突变常用技术,与TILLING筛选相比,ARMS-PCR技术具有特异性高、成本低、简便等优点。小麦淀粉是影响小麦加工品质的关键性因素,小麦胚乳中的直链淀粉含量与抗性淀粉含量相关。淀粉分支酶(SBE)是支链淀粉合成关键酶,其突变可以提高直链淀粉含量。本研究利用EMS诱变紫粒小麦“YG509”,对大田中EMS诱变的M2代紫粒小麦品系材料进行了调查统计,通过构建DNA池,利用ARMS-PCR方法进行筛选并鉴定目标基因突变的突变体。获得的主要结果如下:(1)使用0.8%、1.0%、1.2%EMS溶液对紫粒小麦“YG509”进行诱变处理,确定1.0%EMS溶液浓度为最适浓度。(2)利用1.0%EMS溶液处理了7000粒紫粒小麦“YG509”,M1代有2962个单株收获了种子,M2代有2910个单株收获了种子。(3)对M2代诱变群体进行田间调查,共发现有967个植株发生一个或多个性状的突变,总突变频率为33.2%。获得的M2代突变类型共有5种:叶型、穗型、株型、抽穗期和粒型。不同的突变类型突变频率不同。(4)以wx-D1b基因为标记基因,利用PCR鉴定,确定了每100个单株构建一个DNA池,PCR反应体系中的DNA模板量为50 ng。(5)通过对ARMS-PCR体系进行优化,寻找到合适的引物浓度为5μM。(6)利用ARMS-PCR方法设计特异性引物对DNA池进行初步筛选。对筛选出的每个DNA池中的植株再进行筛选鉴定。对筛选出的突变植株的突变位点进行PCR扩增和测序验证,获得了Ta SBEIIa基因发生突变导致翻译提前终止的突变植株。
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