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本文建立了一种新的RP-HPLC-FL法同时测定莲子心中三种双苄基异喹啉类生物碱含量的方法,并将该方法和RP-HPLC-UV做比较。以Hypersil-C18 (250 mm×4.6mm, 5μm)为固定相,甲醇-乙腈-水-三乙胺(20: 40: 40: 0.12,v/ v/v/v)为流动相,紫外检测波长和荧光检测波长分别从紫外扫描和荧光扫描获得,流速为1.0 mL·min-1。结果发现三种生物碱的荧光激发光谱和发射光谱图各自之间相似,荧光最佳波长为λex=280 nm和λem=620 nm。HPLC-UV和HPLC-FL测定三种生物碱,其线性分别在1~50μg/mL和10~100μg/mL范围内良好,日内和日间RSD值在1.0~8.0%,3种生物碱的加样回收率在95~105%。紫外检测的最低检测限和最低定量限分别为250~500 ng/mL和500~1000 ng/mL,荧光检测的最低检测限和最低定量限分别为500~1000 ng/mL和1000~2500 ng/mL。利用两种检测器测定了不同批次提取的莲心总碱中3中生物碱的含量,结果显示两种方法测得的含量相近。这表明:莲子心中3种双苄基异喹啉类生物碱的RP-HPLC-FL检测方法简单、可靠、结果准确,是一种新的样品含量测定方法。第二部分甲基莲心碱对胺碘酮在大鼠体内药动学的影响研究1.胺碘酮的小样本量血样药物浓度测定方法的优化关于胺碘酮(amiodarone)在生物样本中浓度的测定方法,文献已有报道。这些方法存在针对大样本量的生物样品或固相萃取等耗费比较大等缺点。本部分采用耗费比较小的沉淀蛋白和液-液萃取结合的方法来处理小样本量生物样本,优化了amiodarone的测定方法。本方法采用Agilent 1100系列高效液相色谱仪(G1310A平流泵,20μL定量环手动进样器,G1314A可变波长紫外检测器, LGC-1025M柱温箱,Sepu3000p色谱工作站),以Hypersil ODS-C18 (4 mm×10 mm,粒径10μm)为固定相,以甲醇-水-乙腈-冰醋酸(200/36/23.6/0.86, v/v/v/v; pH 7.53)为流动相,采用乙腈沉淀和二氯甲烷萃取相结合的方法对样品进行预处理。在本实验条件下,amiodarone和内标它莫昔芬(tamoxifen)均有较好的色谱峰和较好的分离度(R > 2),tamoxifen和amiodarone的保留时间分别约为8 min和20 min;6个不同来源的SD大鼠空白血浆中的杂质都不干扰样品峰,特异性较高;采用加权二乘法计算的标准曲线线性良好,偏差较小,r≥0.99;低、中、高三种浓度的amiodarone的绝对回收率在80-95%范围内,内标的回收率在78-82%范围内;日内和日间精密度分别小于9.4%和10.1%;amiodarone的相对回收率在96-103%范围内;amiodarone标准品放在4 oC放置一个月、经过萃取的血浆样品残渣在室温避强光放置12 h、血浆样品在-60 oC的冰箱内放置1个月和经历三次冰融循环均稳定。2.甲基莲心碱对胺碘酮在大鼠体内药代动力学的影响胺碘酮(amiodarone)又称乙胺碘呋酮,是一种常用的III类抗心律失常药,临床上用来治疗室上性和室性心律失常。Neferine是从中药莲子心中提取出来的一种抗心律失常的有效成分,我们课题组拟研究amiodarone和neferine的联合用药。本实验的目的是考察neferine对amiodarone的药代动力学影响。本实验采用SD大鼠,随机分成两组,第一组用于研究neferine对口服amiodarone药代动力学的影响;第二组用于研究neferine对静脉amiodarone药代动力学的影响。实验中neferine均采用灌胃给药。在预先设定的时间点从大鼠的眼眶静脉丛处取得血样并立即离心取出血浆,冰冻在-60 oC的冰箱内保存,直到样品分析。获得amiodarone的药时曲线,计算药代参数,利用方差分析比较组间Cmax和AUC0-96值。研究发现,预先给予neferine和立即给予neferine均对amiodarone的药代动力学没有明显的影响。我们推测,联合neferine和amiodarone给药并不需要调整amiodarone的给药剂量,而且不需要进行很严密的amiodarone的血药浓度监控。