[目 的]胶质瘤是最常见的中枢神经系统(central nervous system,CNS)恶性肿瘤,占颅内恶性肿瘤的50%以上。在国内,其5年死亡率位居恶性胰腺癌和原发性肺癌之后,在所有肿瘤中排名第三。其中,胶质母细胞瘤(Glioblastom,GBM)因其所具有的,超乎寻常的侵袭能力、增殖能力、抗凋亡能力、促血管生成能力及快速耐药耐放疗等特性,在WHO分级中位列恶性程度最高的IV级。目前国内胶质母细胞瘤的治疗主要是手术切除联合放化疗的经典治疗方案,但即便是依从性高且配合治疗的患者,12个月的中位生存时间亦难以逾越。不仅如此纵使近几十年的临床医药发展突飞猛进,胶质母细胞瘤病人的5年生存率却一直裹足不前,鲜有改观。这提示我们GBM的治疗急需新的治疗方案及治疗药物。通过相关的文献检索查询我们发现目前国内的化学药物治疗第一线方案都是以咪唑并四嗪类烷化剂替莫唑胺(Temozolomide,TMZ)为基础的化疗,药物选择极其单一,一旦替莫唑胺出现耐药,患者将直接面临死亡的风险。进一步的文献探索挖掘发现,烷化剂替莫唑胺是对肿瘤DNA分子中氧原子和氮原子的烷基化,发挥药物自身所携带着的细胞毒作用,继而干扰胶质瘤细胞的复制与分裂。也就是说,替莫唑胺主要是针对快速增值的DNA分子也就是连续复制增殖分裂的普通胶质瘤细胞,但对胶质瘤干细胞缺乏有效活性。胶质瘤干细胞是最早被发现并提取出的肿瘤干细胞之一,现代研究证明,在特定的无血清培养基中,胶质瘤干细胞的遗传背景和分子表达等特性可在EGF及bFGF等细胞因子的作用下,保持长期稳定而不分化改变。这种基因组相对稳定的特性使得胶质瘤干细胞能够成为筛选抗肿瘤干细胞化疗药物的重要模型。至此,虽然筛选模型的问题解决了,但如果要使用新开发出的化学合成或天然组分提取药物进行筛选实验,势必面临着药物研发难度大、医疗费用成本高、临床Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期测试难度大等各项问题,据统计,一个新药从研发到上市往往会耗费10-20年甚至更多时间。故为了节省试验时间,提高临床医学转化和推广效率,我们直接对已经上市销售的药物进行抗胶质瘤干细胞的筛选。通过前期实验,我们发现原发性高血压药非洛地平对胶质瘤干细胞具有一定的杀伤作用,本课题即是对非洛地平选择性杀伤胶质瘤干细胞的能力及其相关机理进行展开研究。[方 法]首先将非洛地平缓释片充分碾磨碾碎,并用溶剂二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)尽快稀释为 10mg/ml浓度的药液,5,000 r/min,5 min离心沉淀辅料,如淀粉等,取上清药液。利用中科院昆明动物研究所,赵旭东研究员课题组的药物筛选平台对非洛地平杀伤胶质瘤干细胞(GSC-12#、GSC-18#)的半数抑制浓度IC50进行定量测量,并与正常小脑胶质细胞HAC,正常人肾上皮细胞293t进行差异对比。确定非洛地平对胶质瘤干细胞和正常细胞之间存在杀伤差异之后,通过免疫荧光、流式细胞术、MTS法、克隆形成等试验,将非洛地平对胶质瘤干细胞的抑制效力进行量化,进一步探索验证非洛地平对胶质瘤干细胞的抑制作用及其相关机理。[结 果]通过实验我们发现已上市药物非洛地平能有效抑制胶质瘤干细胞GSC-12#、GSC-18#的增殖能力,并通过凋亡途径诱导GSCs的死亡。且非洛地平对人正常细胞抑制浓度为对肿瘤干细胞抑制浓度的1/3,具有一定选择性,即副作用较小。[结 论]胶质瘤干细胞是胶质瘤尤其是高级别胶质瘤复发率高、侵袭力强及胶质瘤放化疗抵抗的主要原因,但现有治疗方案,尤其是药物化疗,对胶质瘤干细胞杀伤作用较差、抑制能力较弱,这使得胶质瘤干细胞这一治疗靶标难以应用于临床实际中。本次实验证明降压药非洛地平可抑制胶质瘤干细胞(GSC-12#、GSC-18#)的增殖,并通过Caspase途径,使得GSC-12#、GSC-18#凋亡,且能有效破坏肿瘤干细胞的克隆球,有效抑制该肿瘤干细胞的“干性”。且作为已上市药物,相比较新药的审批及其他临床实验的经济成本和实践成本,非洛地平的易得性、经济性和实用性都大大得到提升,这表明非洛地平有成为新型抗胶质瘤药物的潜力。