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目的:肾缺血再灌注损伤(ischemia and reperfusion injury,IRI)是多种肾病如急性肾衰竭的主要原因,如何避免和减少肾IRI,成为临床亟待解决的问题。本实验通过对体外培养肾小管上皮细胞(human kidney-2,HK-2)进行缺氧复氧(hypoxia/reperfusion,H/R)及丹参酮磺酸钠ⅡA(TanshinoneⅡA,TSNⅡA)刺激,建立HK-2缺氧/复氧模型模拟肾IRI,检测其相关实验数据,探讨TSNⅡA处理后对H/R HK-2氧化应激、凋亡及自噬等水平的影响及可能产生影响的机制。以期为丹参治疗肾脏疾病提供理论依据,可望为临床上应用丹参酮ⅡA防治肾IRI提供实验基础及理论依据,为肾IRI临床治疗提供新的思路,并以期为肾移植术后急性排斥反应等疾病的防治提供新的策略,同时也为丹参酮ⅡA的临床应用拓展新的领域。方法:取传代培养的HK-2细胞建立H/R诱导细胞模型,实验分为正常对照组,单纯H/R组以及H/R+不同浓度TSNⅡA组。实验采用方法包括光镜下观察各组细胞的形态学变化;采用CCK-8法测定H/R HK-2细胞增殖水平;流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)检测细胞凋亡水平;使用荧光显微镜观察细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生水平、并且通过荧光酶标仪进行定量检测;Western blot检测Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3等凋亡蛋白,AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR等通路蛋白表达。结果:与对照组比较,单纯H/R组HK-2细胞增殖活性明显减少,为(43.6±10.1)%;中低浓度TSNⅡA作用下可提高H/R HK-2细胞的增殖活性,10μg/mL浓度的TSNⅡA对H/R HK-2细胞的增殖具有最明显的保护作用,为(79.1±11.1)%,与单纯H/R组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。20μg/mL浓度TSNⅡA组相对于10μg/mL浓度组对细胞增殖有一定的抑制作用,为(51.0±10.4)%(P<0.05)。与缺氧/复氧组比较,共聚焦荧光显微镜下TSNⅡA减少细胞内活性氧产生。流式细胞术检测发现各浓度TSNⅡA均对H/R HK-2细胞凋亡有一定抑制作用,其中以20μg/mL最为明显(P<0.05)。Western blot结果提示在TSNⅡA作用下H/R HK-2细胞后凋亡抑制蛋白Bcl-2上调,而促凋亡蛋白Bax下调;凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3在TSNⅡA作用下有一定的下调。p-AKT、p-mTOR等通路蛋白则在TSNⅡA作用下表达上调。结论:TSNⅡA对H/R HK-2有一定的保护作用,可能通过mTOR信号通路抑制氧化应激反应减少细胞凋亡,对H/R HK-2细胞产生保护作用。本研究为丹参治疗肾脏疾病提供了一定理论依据,可望为临床上应用丹参酮ⅡA防治肾IRI提供一定实验基础及理论依据,为肾IRI临床治疗提供新的思路,但其更明确及准确的作用机制还需进一步深入研究。