从HSF1基因敲除小鼠心肌中筛选及克隆热休克反应中受HSF1调控的靶基因

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用cDNA芯片从热休克转录因子1(heat shock transcription factor 1,HSF1)基因敲除小鼠心肌组织中筛选热休克反应中受HSF1调控的靶基因,并对筛选到的未知基因进行分子克隆。方法:①用cDNA芯片检测热休克反应(42℃ 15分钟,恢复3小时)中HSF1-/-小鼠心肌组织基因表达谱的改变(以HSF1+/+小鼠为对照);②用RT-PCR对cDNA芯片筛选结果进行验证;③对差异表达的已命名基因进行启动子区HSF1结合位点的分析;④利用生物信息学方法对筛选到的未知基因进行分子克隆。结果:①共筛选到差异表达基因1142个;其中在HSF1-/-小鼠心肌中表达下调的基因为398个,已命名基因为173个;在HSF1-/-小鼠心肌中表达上调的基因为641个,已命名基因为235个。②在HSF1-/-小鼠心肌中表达下调2.5倍的已命名基因中,有5个基因启动子区含有热休克元件(heat shock element,HSE);在HSF1-/-小鼠心肌中表达上调2.5倍的已命名基因中,有5个基因启动子区含有HSE;③克隆并在GenBank上登录人XLHSRF-1基因(GenBank ID:AY221994)和大鼠XLHSRF-2基因(GenBank ID:AY248698)。结论:在热休克反应中,HSF1-/-小鼠心肌中多个基因表达发生改变;在这些差异表达基因中,有10个基因启动子区含HSE元件,可能受HSF1直接调控;采用生物信息学方法,克隆了两个新的应激相关基因,为进一步研究这些基因的功能及其在应激反应中的作用奠定了基础。
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