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致病性大肠杆菌是猪的一种常见的肠道病原菌,可引起仔猪黄痢、白痢和仔猪水肿病,严重影响断奶仔猪的生长发育,引起料肉比升高、生猪养殖经济效益下降[1]。LPS是大肠杆菌致病的主要毒素之一,会造成动物机体的肝、肾、心和脑的炎性损伤,严重者还会进入血液循环引起毒血症,造成动物休克乃至死亡。对于此类疾病,中兽医常采取清热解毒类的中药,如黄连或含有黄连的复方进行防治。为了研究中药黄连防治大肠杆菌性肠道疾病的作用机制,本文通过选用LPS构建猪肠道上皮细胞体外炎性模型,研究黄连水提物及其有效成分小檗碱对LPS诱导的猪肠道上皮细胞的炎性损伤的干预作用及其机制,结果如下:1、经蒸馏水煎煮提取黄连干燥品两次后,并真空旋转蒸发浓缩成1g生药/mL的黄连水提物,经分光光度计检测确定本次黄连水提物中的小檗碱含量为7%,符合药典要求。2、使用不同浓度的LPS、黄连水提物和小檗碱液与猪肠道上皮细胞共培养24h后,MTT法检测仔猪肠上皮细胞的细胞活力,确定5?g/mL的LPS为最适造模浓度,会导致细胞略微皱缩变圆,还可见小块的细胞脱落区域。0.1mg/mL、0.5mg/mL及5mg/mL作为黄连水提物的低、中、高浓度;75?g/mL、150?g/mL、250?g/mL分别作为小檗碱的低、中、高三个浓度。3、使用不同浓度黄连水提物和小檗碱与猪肠道上皮细胞共培养4h后,再与5?g/mL的LPS共培养1h,Trizol法提取总RNA,两步法反转录获得cDNA,Rreal-time PCR法检测细胞炎性因子mRNA的表达。结果表明:与对照组相比,LPS可诱导猪肠道上皮细胞IL-1?、IL-6、TNF-αmRNA的表达极显著增加（P<0.01）,而使用黄连水提物和小檗碱进行预处理后,上述的炎性细胞因子的表达则显著或极显著（P<0.05或P<0.01）下降,且与药物剂量呈正相关。4、使用不同浓度黄连水提物和小檗碱与猪肠道上皮细胞共培养4h后,再与5?g/mL的LPS共培养1h后,RIPA法提取细胞总蛋白,BCA法测定蛋白浓度,Western-Blot法检测细胞中NF-κB/MAPKs信号通路关键蛋白p-IκBα/IκBα、p-p65/p65、p-JNK/JNK、p-p38/p38、p-ERK/ERK的表达水平,结果表明:LPS可诱导猪肠道上皮细胞中NF-?B/MAPK信号通路蛋白p-IκB、p-p65/p65、p-JNK、p-p38和p-ERK/ERK表达水平显著或极显著升高（P<0.05或P<0.01）,黄连水提物可抑制猪肠道上皮细胞内IκBα、p65、JNK的表达和磷酸化,并抑制p38、ERK1/2的表达,抑制LPS诱导的猪肠道上皮细胞的炎性细胞信号通路的激活;小檗碱也可抑制猪肠道上皮细胞内IκBα、p65的表达及磷酸化以及p38、ERK1/2、JNK蛋白的表达而抑制LPS诱导的猪肠道上皮细胞的NF-?B/MAPKs信号通路的激活。综上所述,黄连水提物和小檗碱可通过抑制NF-κB/MAPK信号通路的关键蛋白激活和表达,进而抑制下游炎性细胞因子IL-1?、IL-6、TNF-αmRNA的表达,达到调控LPS诱导的猪肠道上皮细胞的炎性反应的作用,阐释了黄连水提物及其有效成分小檗碱对LPS诱导的猪肠道炎性反应的作用及其机制。