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目的研制以甜茶提取物为主要成分的甜茶护齿含片,研究甜茶护齿含片对致龋变形链球菌的粘附以及产酸抑制作用。探讨主要成分为天然植物甜茶提取物的护齿含片对致龋变形链球菌的作用,为开发和利用广西特产植物---甜茶提供实验依据。方法1、甜茶护齿含片的研制按照保健食品的配方原则与寻求价廉、无毒副作用无致龋性的健齿护齿的保健目标来选择原料,并根据本课题的前期实验所得的最低抑菌浓度(MIC)测定结果,选取该MIC值以下的甜茶甙溶液作为含片中甜茶甙的添加浓度。结合本课题组所提供的的参考处方,通过正交试验,确定甜茶护齿含片的最优处方。再采用传统湿法制粒法,以片剂的生产方法制备。2、甜茶护齿含片的细菌学实验2.1过饱和甜茶护齿含片混悬液的配制和菌液的制备2.1.1将制备好的甜茶护齿含片在无菌条件下研磨成粉末后采用二倍稀释法,用TTY培养基将甜茶护齿含片配制成5g/50ml至0.313g/50ml的溶液。2.1.2将冻干粉状S.mutans于TSB培养基中活化3h后,接种于TTY液体培养基中,在37℃条件下厌氧培养48h,离心,收集细菌,洗菌后,于15ml无菌生理盐水内制成混悬液,调540nm波长处光密度值(Optical Density,OD)为1.0的菌悬液。2.1.3甜茶护齿含片对变形链球菌的粘附抑制作用取甜茶护齿含片混悬液,用含1%蔗糖的TTY液体培养基对甜茶护齿含片混悬液进行对倍稀释成5个浓度,按菌液与甜茶护齿含片液1:10(V/V)比例接种S.mutans,插入玻棒后所有试管垂直放置37℃厌氧培养48h后,将粘附到玻棒的细菌用NaOH溶液洗脱,测定OD540的光密度值。以粘附在玻棒上的细菌的OD值来表示变形链球菌对玻棒的粘附能力。2.1.4甜茶护齿含片对变形链球菌产酸的影响取甜茶护齿含片混悬液,用含1%蔗糖的TTY液体培养基对甜茶护齿含片混悬液进行对倍稀释成5个浓度,按菌液与甜茶护齿含片液1:10(V/V)比例接种S.mutans,37℃下厌氧培养48h,并求出培养前后pH值及其变化值△pH。结果1、甜茶护齿含片的较优处方为每一百克甜茶护齿含片含甜茶甙5.5%,含微晶纤维素20%,糊精74.5%。所得甜茶护齿含片外观为双凸圆形,呈淡黄绿色,外表光滑没有裂片,没有肉眼可见的杂质,入口清凉,滋味甘甜,具有甜茶的特殊风味。2、在粘附实验中,随着甜茶护齿含片浓度的升高,粘附在玻棒上的变形链球菌沉淀混悬液的OD值逐渐减小。甜茶护齿含片组与阴性对照组OD值总体均数之间差异均有统计学意义,即甜茶护齿含片具有抑制S.mutans粘附的能力。3、在产酸实验中,产酸实验后各浓度组pH值都较实验前下降,只有在浓度组小于等于0.313g/50ml时, P>0.05,差异无统计学意义。在其余各组P<0.01,差异有统计学意义。过饱和甜茶护齿含片不同浓度组与阴性对照组△pH值的总体均数间比较具有差异,即甜茶护齿含片具有抑制S.mutans产酸的能力。结论1、甜茶护齿含片的最优处方为:甜茶甙5.5g,微晶纤维素20g,糊精74.5g,薄荷脑1g。2、甜茶护齿含片可明显抑制变形链球菌在玻棒表面的粘附作用。3、甜茶护齿含片具有抑制变形链球菌的产酸作用。4、甜茶护齿含片在龋病防治领域,有望成为一种新型的防龋保健食品。