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据不完全统计,我国大约有74%的农业耕作土壤不同程度的缺磷,这一事实限制了农业产量。为了提高农业产量,最有效的措施是使用磷肥。大量施用化学肥料不仅增加了农业投入,而且会破坏土壤结构,并造成环境污染。本论文以丛枝菌根真菌(AMF)为研究对象,探讨了分离的AM真菌菌株的生态分布特点及其生物学特性,设计并应用了用于田间检测的分子探针,建立了嵌套多重PCR快速检测技术等。为深入研究或开发AM真菌生物资源,改善土壤环境,创建新型的可持续农业管理模式提供了有用的科学依据。论文在以下几个方面开展工作并取得相应研究结果: 采用“Trap culture”方法将从我国农业耕作土壤采集的52份土样进行AM真菌繁殖,通过运用“Sieving and decanting”方法和单孢分离、培养技术,获得了34株AM真菌。其中大多数为Glomus属的成员。经过无性孢子形态学分类和基于PCR现代生物技术的检测,15种分离的AM真菌鉴定为我国新记录种,17种被国际AM真菌菌种保藏中心(IEB)收藏。通过温室盆栽试验,从获得的AM真菌中筛选到对玉米生长有明显促生作用的菌株HAU-01(Glomus constrictum)。田间接种试验效果表明,该菌不仅能促进玉米苗期生长,提高子苗成活率,而且促使玉米产量增产11.8%,种子淀粉含量提高0.42%。 接种AM真菌Glomus mosseae,Glomus intraradices,Gigaspora margarita和混合接种剂(Gmosseae+G.intraradices+Gig.margarita)明显改善了宿主植物对土壤重金属的抗性。模拟Cd污染土壤的接种试验证明,不同AM真菌对重金属Cd的敏感性有一定差异。高效耐Cd菌根真菌G.mosseae能将约80%的Cd累积于根系及菌丝中,减少了Cd向宿主植物地上部分的转运的速度和浓度,从而缓解了土壤中Cd对植物的毒害作用。这一发现有可能从一个侧面解释菌根植物的抗逆机制和AMF在镉污染环境中的生物修复作用的应用潜力。结果还表明,随着土壤Cd水平的提高,琥珀酸脱氢酶(SDH)和碱性磷酸酶(ALP)活性降低,说明这两种酶对土壤中的Cd含量敏感。 通过对AM真菌核糖体基因25S rDNA的D1-D2高可变区域的序列分析,设计了用于嵌套PCR扩增的种特异性引物XLD3-NDL22、XLO3-NDL22、XLA2-LR1等。这些种特异性引物不仅从混杂的DNA样品中扩增到特定的序列,而且从多种AM真菌混合侵染的植物根系中特异性的检测到相应的真菌。分子探针和嵌套PCR技术的