丛枝菌根真菌的分离鉴定和生物学特性研究及分子探针的设计与应用

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据不完全统计,我国大约有74%的农业耕作土壤不同程度的缺磷,这一事实限制了农业产量。为了提高农业产量,最有效的措施是使用磷肥。大量施用化学肥料不仅增加了农业投入,而且会破坏土壤结构,并造成环境污染。本论文以丛枝菌根真菌(AMF)为研究对象,探讨了分离的AM真菌菌株的生态分布特点及其生物学特性,设计并应用了用于田间检测的分子探针,建立了嵌套多重PCR快速检测技术等。为深入研究或开发AM真菌生物资源,改善土壤环境,创建新型的可持续农业管理模式提供了有用的科学依据。论文在以下几个方面开展工作并取得相应研究结果: 采用“Trap culture”方法将从我国农业耕作土壤采集的52份土样进行AM真菌繁殖,通过运用“Sieving and decanting”方法和单孢分离、培养技术,获得了34株AM真菌。其中大多数为Glomus属的成员。经过无性孢子形态学分类和基于PCR现代生物技术的检测,15种分离的AM真菌鉴定为我国新记录种,17种被国际AM真菌菌种保藏中心(IEB)收藏。通过温室盆栽试验,从获得的AM真菌中筛选到对玉米生长有明显促生作用的菌株HAU-01(Glomus constrictum)。田间接种试验效果表明,该菌不仅能促进玉米苗期生长,提高子苗成活率,而且促使玉米产量增产11.8%,种子淀粉含量提高0.42%。 接种AM真菌Glomus mosseae,Glomus intraradices,Gigaspora margarita和混合接种剂(Gmosseae+G.intraradices+Gig.margarita)明显改善了宿主植物对土壤重金属的抗性。模拟Cd污染土壤的接种试验证明,不同AM真菌对重金属Cd的敏感性有一定差异。高效耐Cd菌根真菌G.mosseae能将约80%的Cd累积于根系及菌丝中,减少了Cd向宿主植物地上部分的转运的速度和浓度,从而缓解了土壤中Cd对植物的毒害作用。这一发现有可能从一个侧面解释菌根植物的抗逆机制和AMF在镉污染环境中的生物修复作用的应用潜力。结果还表明,随着土壤Cd水平的提高,琥珀酸脱氢酶(SDH)和碱性磷酸酶(ALP)活性降低,说明这两种酶对土壤中的Cd含量敏感。 通过对AM真菌核糖体基因25S rDNA的D1-D2高可变区域的序列分析,设计了用于嵌套PCR扩增的种特异性引物XLD3-NDL22、XLO3-NDL22、XLA2-LR1等。这些种特异性引物不仅从混杂的DNA样品中扩增到特定的序列,而且从多种AM真菌混合侵染的植物根系中特异性的检测到相应的真菌。分子探针和嵌套PCR技术的
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