【摘 要】
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鸭传染性浆膜炎是由鸭疫里氏杆菌（Riemerella anatipestifer,RA）感染引起的一种急性败血性传染病,雏鸭或雏鹅感染后死亡率较高且传播迅速,给水禽养殖业带来巨大危害。课题组前期在鸭疫里氏杆菌中发现了Pho P/Pho R双组份调控系统,构建的ΔPho P/Pho R、ΔPho P及ΔPho R缺失株的毒力均显著下降,进一步发现KYF39＿09285和KYF39＿09945在ΔPh
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（31872498）；
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鸭传染性浆膜炎是由鸭疫里氏杆菌（Riemerella anatipestifer,RA）感染引起的一种急性败血性传染病,雏鸭或雏鹅感染后死亡率较高且传播迅速,给水禽养殖业带来巨大危害。课题组前期在鸭疫里氏杆菌中发现了Pho P/Pho R双组份调控系统,构建的ΔPho P/Pho R、ΔPho P及ΔPho R缺失株的毒力均显著下降,进一步发现KYF39＿09285和KYF39＿09945在ΔPho P及ΔPho R中均为表达下调的基因,因此推测KYF39＿09285和KYF39＿09945可能与鸭疫里氏杆菌的毒力有关。本试验分别构建KYF39＿09285和KYF39＿09945单基因缺失株及其相应的基因回补菌株,进一步研究其生物学特性和对雏鸭毒力的影响,主要结果如下:1.KYF39＿09285和KYF39＿09945基因及其编码蛋白的生物信息学分析KYF39＿09285基因大小为483 bp,其编码蛋白具有TPR（四肽重复）结构域,无信号肽;KYF39＿09945基因大小为321 bp,其编码蛋白未预测到保守结构域及信号肽;预测了这两个蛋白的蛋白质互作网络。2.KYF39＿09285和KYF39＿09945单基因缺失突变株及相应回补菌株的构建构建重组自杀性质粒p RE112-LSR并导入亲本株RA-YM,分别构建了RA-YMΔKYF39＿09285和RA-YMΔKYF39＿09945两个单基因缺失突变株;再分别将KYF39＿09285和KYF39＿09945基因导入基因缺失株,构建其相应的回补菌株RA-YMCΔKYF39＿09285和RA-YMCΔKYF39＿09945。构建的基因缺失株及其回补菌株遗传稳定性良好。3.RA-YMΔKYF39＿09285基因缺失株的生物学特性及对雏鸭毒力的影响KYF39＿09285基因在高渗、高温、青霉素或链霉素胁迫时,表达量显著升高。Dna K是一种热休克蛋白,作为分子伴侣,可以在生理或应激情况下,帮助蛋白质正确折叠。RA-YMΔKYF39＿09285缺失株中Dna K的表达量较亲本株RA-YM显著降低。与亲本株相比,缺失株对高渗、青霉素、氨苄西林、庆大霉素和链霉素的敏感性增强,其回补株表现与RA-YM基本一致。RA-YM和RA-YMΔKYF39＿09285对8日龄樱桃谷肉鸭的半数致死量(LD50)分别为3.62×10~4CFU和6.66×10~4CFU,缺失株的毒力比亲本株降低了1.84倍。基因缺失株及其回补株,在对Vero细胞的黏附入侵能力、生长特性、生化特性及对高浓度磷酸盐的适应等表型实验中,与RA-YM相比无显著差异。4.RA-YMΔKYF39＿09945基因缺失株的生物学特性及对雏鸭毒力的影响与亲本株RA-YM相比,RA-YMΔKYF39＿09945缺失株在含高浓度磷酸盐的培养基中生长速度减缓,其回补菌株生长速度与RA-YM相比无显著差异。RA-YMΔKYF39＿09945缺失株对8日龄樱桃谷肉鸭的LD50为1.33×10~4CFU,其毒力比亲本株增强了2.71倍。RA-YMΔKYF39＿09945及其回补株在对Vero细胞的黏附入侵能力、生长特性、生化特性等表型实验中,与RA-YM相比无显著差异。综上所述,本试验分别构建了RA-YMΔKYF39＿09285和RA-YMΔKYF39＿09945基因缺失株及其基因回补菌株;与亲本株相比,RA-YMΔKYF39＿09285的毒力降低了1.84倍,RA-YMΔKYF39＿09945的毒力增强了2.71倍;KYF39＿09285能影响Dna K的表达量,还与RA对高渗、高温及对β-内酰胺类和氨基糖苷类抗生素的耐受能力密切相关,KYF39＿09945参与了RA对高浓度磷酸盐的适应性调节。为进一步研究鸭疫里氏杆菌的致病机制奠定了基础。
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