蛋白质精氨酸甲基化(Protein arginine methylation)是一种普遍存在的翻译后修饰现象,最新研究表明,其家族成员蛋白质精氨酸甲基化转移酶6(Protein arginine methyltransferases 6,PRMT6)在人和哺乳类中被视为TBK1/IRF3信号传递的抑制因子。为了探索PRMT6在硬骨鱼类中作用,本研究克隆了青鱼(black carp,Mylopharyngodon piceus)PRMT6的CDS序列并初步探索了其在青鱼抗病毒天然免疫反应中的功能,具体研究内容和结果如下:1.在进化和结构方面,青鱼PRMT6(bcPRMT6)基因的CDS序列含有1068个核苷酸,共编码355个氨基酸;利用ExPASy软件预测bcPRMT6蛋白的分子量为39.61KDa,等电点为5.61。在进化史上,BcPRMT6与金鱼PRMT6的同源性最高,高达96.6%;其次是斑马鱼PRMT6,同源性96.3%。根据氨基酸序列的比对发现与哺乳动物PRMT6同源性也较高,尤其在结构进化上中保守主要体现在甲基化转移酶(Methyltransferase,MTA)结构域。2.在蛋白和RNA水平表达方面,qPCR实验表明:bcPRMT6在青鱼肾细胞(MPK)中的转录水平响应于不同的刺激,说明bcPRMT6参与了由病毒或细菌引起的宿主天然免疫反应。免疫印迹实验显示bcPRMT6在EPC细胞中能表达且蛋白迁移大小约43 kDa。与哺乳动物相同,bcPRMT6主要定位于细胞核中。3.在功能调节方面,通过双荧光素报告基因实验表明bcPRMT6几乎不具备上调干扰素(IFN)启动子表达的能力,同时在病毒噬斑实验中bcPRMT6也没有显示出抗病毒(草鱼呼肠孤病毒(GCRV)或春季鲤鱼病毒血症(SVCV))活性。当与bcPRMT6共表达时,青鱼TBK1(bcTBK1)和IRF3/7(bcIRF3/7)对干扰素启动子活性的诱导能力被强烈抑制。与此同时,bcPRMT6明显抑制了EPC细胞中bcTBK1介导的抗病毒活性。进一步的共免疫沉淀实验表明bcPRMT6和bc IRF3/7之间存在相互作用,但并没有检测到bcPRMT6和bcTBK1之间的直接相互作用。4.综上所述,我们的研究首次阐明了在硬骨鱼中PRMT6在宿主抗病毒先天免疫激活过程中抑制TBK1-IRF3/7信号传递。