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目的甲状腺激素对肿瘤的生长作用已经得到了普遍的认可,但甲状腺激素促进肿瘤细胞的增殖作用还未明确,有待进一步的探索。大量研究表明,整合素αvβ3在肿瘤细胞的增殖和肿瘤的血管形成中有重要作用,整合素αvβ3为这两种作用的一个共同起始点。本研究利用人胶质母细胞瘤细胞(SNB19)为研究对象,以整合素αvβ3为切入点,通过甲状腺激素(主要为T4)、甲状腺激素类似物(Tetrac)及蛋白激酶(PKC)抑制剂(BiS)的作用,研究肿瘤细胞的PKC/蛋白激酶(PKD1)/组蛋白去乙酰化酶(HDAC)5信号通路以及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外信号调节激酶(ERK)1/2信号通路,证明甲状腺激素可以通过该通路促进肿瘤细胞增殖。内容本实验以人胶质母细胞瘤细胞(SNB19)为研究对象,给予甲状腺激素T4、Tetrac及Bis进行干预,通过Western印记、3-(4,5)-2-唑噻-(2,5)-二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)比色法、酶联免疫吸附试验(ELISA)实验技术,研究甲状腺激素T4通过PKC/PKD1/HDAC5信号通路以及MAPK/ERK1/2信号通路对肿瘤细胞增殖作用。方法(1)将SNB19细胞分为正常对照组、T4(100nmol/L,干预30min)组、Tetrac (100nmol/L,提前干预30min)组、T4(100nmol/L,干预30min)+Tetrac (100nmol/L,提前干预30min)组,应用Western印记实验技术分别检测蛋白激酶D1(PKD1)、组蛋白去乙酰化酶5(HDAC5)的磷酸化、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)的磷酸化。(2)将SNB19细胞分为正常对照组、T4(100nmol/L,干预30min)组、Bis(2.5u mol/L,提前干预30min)组、T4(100nmol/L,干预30min)+Bis (2.5u mol/L,提前干预30min)组,应用Western印记实验技术检测蛋白激酶D1(PKD1)的磷酸化。(3)将SNB19细胞分为正常对照组、T4组(100nmol/L)、Tetrac (100nmol/L)组、T4(100nmol/L)+Tetrac (100nmol/L)组,通过MTT实验技术检测24h、48h、72h时间点490nmOD值,反映SNB19细胞增殖情况。(4)将SNB19细胞分为正常对照组、T4(100nmol/L)组、Tetrac (100nmol/L) ZU, T4(100nmol/L)+Tetrac (100nmol/L)组,通过ELISA实验技术检测干预72hSNB19细胞培养上清VEGF的表达量。结果(1) Western印记：与正常对照组相比,T4干预组PKD1、HDAC5、ERK1/2磷酸化水平均升高(P<0.05)。与T4干预组相比,Tetrac干预组和T4+Tetrac干预组PKD1、HDAC5、ERK1/2磷酸化水平均降低(P<0.05),Bis干预组和T4+Bis干预组PKD1磷酸化水平均降低(P)<0.05)。(2)MTT.与正常对照组相比,T4干预组OD值升高(P<0.05)。与T4干预组相比,Tetrac干预组和T4+Tetrac干预组OD值均降低(P<0.05)。(3) ELISA:与正常对照组相比,T4干预组细胞培养上清VEGF浓度较高(P<0.05), Tetrac干预组及Tetrac+T4干预组细胞培养上清VEGF浓度较低(P<0.05)。结论甲状腺激素T4作用于肿瘤细胞膜上膜受体整合素βvβ3,通过磷酸化PKC,促进PKD1的磷酸化,进而引起HDAC5磷酸化,并使VEGF的表达升高,同时还可通过激活MAPK/ERK1/2信号通路,促进肿瘤细胞的增殖。